治疗糖尿病视网膜病变的纳米粒子的制备及药效学研究
发布时间：2021-07-11 00:50
糖尿病视网膜病变是糖尿病的微血管病变中最常见的并发症,是全球发病率较高的致盲性眼病。糖尿病视网膜病变与高血糖症关系密切,高血糖可以激活多种分子途径,进而导致神经退行性病变以及视网膜新生血管生成。目前,多数治疗从抑制新生血管入手,采用手术或者药物治疗手段,但是治疗效果不理想,不能使已经产生的视网膜损伤恢复。从病因上直接干预视网膜内血糖水平可能是预防及治疗糖尿病视网膜病变的有效策略,然而因眼部结构的特殊性,视网膜疾病的给药手段和药物递送系统有限,在视网膜靶向性、安全性、治疗效果、患者依从性和减少继发感染等方面存在局陷。目的:根据眼内葡萄糖由血-视网膜屏障的葡萄糖转运蛋白转运而来的供应机制,设计并建立针对葡萄糖转运蛋白1的大分子药物,制备表面富集透明质酸用以靶向视网膜色素上皮细胞的载药纳米粒子,对制剂进行表征研究、大分子药物含量测定及安全性评价。纳米粒子眼内给药后,评估纳米粒子药物对糖尿病性视网膜病变的药效学效果。方法:（1）使用体外筛选和T7核酸内切酶1（T7 endonuclease I,T7E1）验证方法筛选稳定的向导RNA（Single guide RNA,sgRNA）,与规律成簇间...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高血糖水平下的多元醇通路[11]
第一章绪论3虽然DR的具体发病机制尚未明确，但可以确定的是，视网膜上的葡萄糖过度转运导致视网膜细胞内的葡萄糖稳态失衡是导致DR发病的重要因素，高葡萄糖水平激活多种信号传导途径，主要有多元醇途径、蛋白激酶C（PKC）的激活[12]、己糖激酶途径及晚期糖基化终产物（AGE）形成增多。这些途径导致氧化应激、炎症和血管功能障碍的增加以及多种生长因子的上调，并最终导致DR的发生发展。图1.2高血糖症激活多种通路[11]1.1.3糖尿病视网膜病变治疗手段糖尿病视网膜病变的病理特征是功能性血管细胞逐渐丧失，血管间连接处缓慢裂解，导致血管渗漏和缺血性神经纤维层梗塞，后期阶段的特征在于炎症细胞浸润、组织破坏和新血管增生。针对糖尿病视网膜病变发展的程度，所施予的治疗方法有所不同。早期的DR以药物治疗为主，晚期及高风险增殖性DR临床多采用手术方法[13]，但手术存在潜在风险、应用范围局限和复发不确定性，使用药物来预防及治疗DR，或者作为一种手术的辅助治疗手段，应用更为广泛。目前，针对DR新开发的有效药物主要为VEGF（血管内皮生长因子）抑制剂和糖皮质激素。VEGF抑制剂通过抑制因视网膜组织血流减少导致的VEGF活化，从而阻断新血管形成和增强血管通透性，对早期DR具有显著影响。但这种
吉林大学硕士学位论文8PAM附近对DNA分子进行裂解。如图1.4所示，所述crRNA包含一个20-nt的protospacer元件和一段可以与tracrRNA互补的附加序列，tracrRNA负责与crRNA杂交并结合蛋白Cas9，共同构成CRISPR-Cas9复合物。Cas9蛋白含有两个核酸酶结构域，分别称为RuvC结构域和HNH结构域，其中，RuvC域切割非互补的DNA链，而HNH域切割互补的DNA链。在基因编辑应用中，tracrRNA：crRNA通常被设计为含有两个关键部分序列的sgRNA，在3"端结合Cas9的和5"末端的引导结合靶DNA序列的双链RNA结构，从而具有识别基因组中的特定序列，和Cas9对DNA序列的剪切的双重作用。图1.4Cas9蛋白酶（A）与sgRNA（B）示意图[38]在CRISPR-Cas9系统介导的基因组编辑形成DNA双链断裂后，非同源末端连接修复途径（NHEJ）或同源定向修复途径（HDR）将被启动。经NHEJ修复途径常常导致基因插入/缺失（InDel），最终导致靶基因失活。需要供体DNA模板以修复HDR途径的DNA双链断裂则可以精确地插入供体DNA模板在指定的DNA序列位点中，从而可以实现基因置换或基因敲入，但通常效率比基因敲除较低。1.3.3CRISPR/Cas9基因编辑在疾病治疗中的应用在临床基因治疗领域，CRISPR/Cas9疗法的应用正在探索中。2016年美国宾夕法尼亚大学提出的CRISPR编辑T细胞治疗方案通过了FDA的批准，并于
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nanotechnology-based strategies for treatment of ocular disease[J]. Yuhua Weng,Juan Liu,Shubin Jin,Weisheng Guo,Xingjie Liang,Zhongbo Hu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(03)
博士论文
[1]血小板反应蛋白-1在小鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用及在糖尿病视网膜病变中的应用价值[D]. 王爽.吉林大学 2012
本文编号：3276993
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高血糖水平下的多元醇通路[11]
第一章绪论3虽然DR的具体发病机制尚未明确，但可以确定的是，视网膜上的葡萄糖过度转运导致视网膜细胞内的葡萄糖稳态失衡是导致DR发病的重要因素，高葡萄糖水平激活多种信号传导途径，主要有多元醇途径、蛋白激酶C（PKC）的激活[12]、己糖激酶途径及晚期糖基化终产物（AGE）形成增多。这些途径导致氧化应激、炎症和血管功能障碍的增加以及多种生长因子的上调，并最终导致DR的发生发展。图1.2高血糖症激活多种通路[11]1.1.3糖尿病视网膜病变治疗手段糖尿病视网膜病变的病理特征是功能性血管细胞逐渐丧失，血管间连接处缓慢裂解，导致血管渗漏和缺血性神经纤维层梗塞，后期阶段的特征在于炎症细胞浸润、组织破坏和新血管增生。针对糖尿病视网膜病变发展的程度，所施予的治疗方法有所不同。早期的DR以药物治疗为主，晚期及高风险增殖性DR临床多采用手术方法[13]，但手术存在潜在风险、应用范围局限和复发不确定性，使用药物来预防及治疗DR，或者作为一种手术的辅助治疗手段，应用更为广泛。目前，针对DR新开发的有效药物主要为VEGF（血管内皮生长因子）抑制剂和糖皮质激素。VEGF抑制剂通过抑制因视网膜组织血流减少导致的VEGF活化，从而阻断新血管形成和增强血管通透性，对早期DR具有显著影响。但这种
吉林大学硕士学位论文8PAM附近对DNA分子进行裂解。如图1.4所示，所述crRNA包含一个20-nt的protospacer元件和一段可以与tracrRNA互补的附加序列，tracrRNA负责与crRNA杂交并结合蛋白Cas9，共同构成CRISPR-Cas9复合物。Cas9蛋白含有两个核酸酶结构域，分别称为RuvC结构域和HNH结构域，其中，RuvC域切割非互补的DNA链，而HNH域切割互补的DNA链。在基因编辑应用中，tracrRNA：crRNA通常被设计为含有两个关键部分序列的sgRNA，在3"端结合Cas9的和5"末端的引导结合靶DNA序列的双链RNA结构，从而具有识别基因组中的特定序列，和Cas9对DNA序列的剪切的双重作用。图1.4Cas9蛋白酶（A）与sgRNA（B）示意图[38]在CRISPR-Cas9系统介导的基因组编辑形成DNA双链断裂后，非同源末端连接修复途径（NHEJ）或同源定向修复途径（HDR）将被启动。经NHEJ修复途径常常导致基因插入/缺失（InDel），最终导致靶基因失活。需要供体DNA模板以修复HDR途径的DNA双链断裂则可以精确地插入供体DNA模板在指定的DNA序列位点中，从而可以实现基因置换或基因敲入，但通常效率比基因敲除较低。1.3.3CRISPR/Cas9基因编辑在疾病治疗中的应用在临床基因治疗领域，CRISPR/Cas9疗法的应用正在探索中。2016年美国宾夕法尼亚大学提出的CRISPR编辑T细胞治疗方案通过了FDA的批准，并于
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nanotechnology-based strategies for treatment of ocular disease[J]. Yuhua Weng,Juan Liu,Shubin Jin,Weisheng Guo,Xingjie Liang,Zhongbo Hu. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2017(03)
博士论文
[1]血小板反应蛋白-1在小鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用及在糖尿病视网膜病变中的应用价值[D]. 王爽.吉林大学 2012
本文编号：3276993
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