黑根霉胞外多糖促进U87MG细胞自噬及其分子机制研究
发布时间：2021-07-22 04:49
自噬是细胞质组分利用溶酶体降解的主要途径。自噬过程发生异常与多种人类疾病相关,如癌症、心肌病等。目前,通过药物靶向调节细胞自噬活性以达到抗肿瘤目的,已经成为癌症治疗的新策略。多糖调节自噬活性的研究逐渐引起人们的关注,并且已取得一定得进展。黑根霉胞外多糖（exopolysaccharides from Rhizopus nigricans,EPS1-1）是从黑根霉菌的发酵液中分离得到的一种均一的杂多糖。前期研究发现,EPS1-1具有免疫增强活性以及良好的抗肿瘤活性,能够诱导肿瘤细胞凋亡,对S180和CT26荷瘤小鼠以及AOM/DSS诱导的结肠癌小鼠肿瘤的生长也有明显的抑制作用。但是,EPS1-1对肿瘤生长的抑制作用是否与调控自噬活性有关目前是未知的。因此,本文研究了EPS1-1对U87MG细胞自噬的影响及其作用机制,并对EPS1-1影响自噬和其与凋亡间的关系进行了初步探讨。通过MTT法和细胞克隆形成实验研究发现EPS1-1可以有效抑制U87MG细胞生长和增殖。电镜观察发现0.4mg/ml的EPS1-1处理48h后,U87MG细胞内产生了自噬溶酶体。自噬小体膜结合形式的LC3（LC3-Ⅱ）...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?ＭＴＴ?（Ａ）和细胞克隆形成实验（Ｂ）检测ＥＰＳＭ对Ｕ８７ＭＧ细胞增殖的影响
理４８ｈ后Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬体结构的变化。结果表明，ＥＰＳ１－１处理后细胞内??存在一定量的自噬溶酶体结构。而对照组细胞内基本无明显的自噬体结构产生??（图３．２）。表明，ＥＰＳ１－１能增加Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬溶酶体结构数量。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＰＳ１－１?（０．４ｍｇ／ｍｌ）??：Ｗ??，?＇嚼，?；＂??明丄，??图３．２ＥＰＳ１－１对Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬体和自噬溶酶体结构的影响。ＡＶｄ：晚期自噬溶酶体。??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ?１－１?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?ａｎｄ??ａｕｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．?Ｔｈｅ??ａｒｒｏｗｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｄｅｇｒａｄｉｎｇ?ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｖａｃｕｏｌｅｓ．??３．３?ＥＰＳｌ－ｌ对Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞内自噬小体数置的影响??ＭＡＰ１ＬＣ３／ＬＣ３是自噬过程中的关键因子，参与自噬体的成熟过程。细胞内??存在两种形式的ＬＣ３。胞质形式ＬＣ３?（ＬＣ３－Ｉ）以及自噬体膜结合形式的ＬＣ３??（ＬＣ３－ＩＩ）。将ＬＣ３与ＥＧＦＰ串联连接，当自噬被激活，由于两种ＬＣ３分布不??同，ＥＧＦＰ－ＬＣ３蛋白也由原来的胞质分布状态转变为膜结合聚集状态，因此，可??见细胞内形成的绿色荧光斑点（ＬＣ３ｐｉｍｃｔａ）
０．４和０．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＰＳ１－１处理Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞２４ｈ之后，焚光显微镜??观察发现，对照组细胞内基本无绿色荧光亮点聚集，而ＥＰＳ１－１处理后细胞内出??现不同程度的荧光亮点聚集（图３．３）。表明，ＥＰＳ１－１能够增加Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ??细胞内自噬小体数量。??图３．３?ＥＰＳ１－１处理对Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞内自噬小体数量的影响。??Ｆｉｇ．?３．３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ??Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１??ｆｏｒ?２４ｈ．?Ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ＬＣ３?ｐｕｎｃｔａ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．??３．４?ＥＰＳ１－１对Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬相关基因表达的影响??细胞内自噬相关基因（ＡＴＧ）涉及对自噬活性的调控。为了进一步研宄??ＥＰＳ１－１对细胞内自嘍相关基因表达的影响，使用ＲＴ－ｑＰＣＲ实验分析了?ＥＰＳ１－１??处理Ｕ８７ＭＧ细胞４８ｈ后，细胞内６个参与自噬过程的基因表达的变化。ＵＬＫ１??是参与自噬早期调节的基因，对于诱导自嗟是必须的［２７］。Ｂｅｃｌｉｎｌ调节自噬，能??够促进该过程的起始。研宄发现：与对照组相比
【参考文献】：
期刊论文
[1]Traditional Chinese herbal extracts inducing autophagy as a novel approach in therapy of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Cong Liu,Jia-Zhi Liao,Pei-Yuan Li. World Journal of Gastroenterology. 2017(11)
[2]细胞自噬的研究方法[J]. 马泰,孙国平,李家斌. 生物化学与生物物理进展. 2012(03)
[3]Modulating autophagy:a strategy for cancer therapy[J]. Jun-Lin Li1,Shao-Liang Han2 and Xia Fan3 1Department of General Surgery,The Central Hospital of Yongzhou City,Yongzhou,Hunan 425000,P.R.China;2Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou,Zhejiang 325000,P.R.China;3State Key Laboratory of Trauma,Burns,and Combined Injury;Research Institute of Surgery,Daping Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400042,P.R.China.. 癌症. 2011(10)
[4]Inhibitory activity of polysaccharide extracts from three kinds of edible fungi on proliferation of human hepatoma SMMC-7721 cell and mouse implanted S180 tumor[J]. JlANG Shi-Ming; XlAO Zheng-Ming and XU Zhao-Hui (Biology Department,Shandong Normal University, Jinan 250014, Shandong Province,China). World Journal of Gastroenterology. 1999(05)
本文编号：3296469
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?ＭＴＴ?（Ａ）和细胞克隆形成实验（Ｂ）检测ＥＰＳＭ对Ｕ８７ＭＧ细胞增殖的影响
理４８ｈ后Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬体结构的变化。结果表明，ＥＰＳ１－１处理后细胞内??存在一定量的自噬溶酶体结构。而对照组细胞内基本无明显的自噬体结构产生??（图３．２）。表明，ＥＰＳ１－１能增加Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬溶酶体结构数量。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＰＳ１－１?（０．４ｍｇ／ｍｌ）??：Ｗ??，?＇嚼，?；＂??明丄，??图３．２ＥＰＳ１－１对Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬体和自噬溶酶体结构的影响。ＡＶｄ：晚期自噬溶酶体。??Ｆｉｇ．?３．２?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ?１－１?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?ａｎｄ??ａｕｔｏｌｙｓｏｓｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．?Ｔｈｅ??ａｒｒｏｗｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｄｅｇｒａｄｉｎｇ?ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ?ｖａｃｕｏｌｅｓ．??３．３?ＥＰＳｌ－ｌ对Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞内自噬小体数置的影响??ＭＡＰ１ＬＣ３／ＬＣ３是自噬过程中的关键因子，参与自噬体的成熟过程。细胞内??存在两种形式的ＬＣ３。胞质形式ＬＣ３?（ＬＣ３－Ｉ）以及自噬体膜结合形式的ＬＣ３??（ＬＣ３－ＩＩ）。将ＬＣ３与ＥＧＦＰ串联连接，当自噬被激活，由于两种ＬＣ３分布不??同，ＥＧＦＰ－ＬＣ３蛋白也由原来的胞质分布状态转变为膜结合聚集状态，因此，可??见细胞内形成的绿色荧光斑点（ＬＣ３ｐｉｍｃｔａ）
０．４和０．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＰＳ１－１处理Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞２４ｈ之后，焚光显微镜??观察发现，对照组细胞内基本无绿色荧光亮点聚集，而ＥＰＳ１－１处理后细胞内出??现不同程度的荧光亮点聚集（图３．３）。表明，ＥＰＳ１－１能够增加Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ??细胞内自噬小体数量。??图３．３?ＥＰＳ１－１处理对Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ细胞内自噬小体数量的影响。??Ｆｉｇ．?３．３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅｓ?ｉｎ??Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．?Ｕ８７ＭＧ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＥＰＳ１－１??ｆｏｒ?２４ｈ．?Ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ＬＣ３?ｐｕｎｃｔａ?ｉｎ?Ｕ８７ＭＧ－ＬＣ３－ＥＧＦＰ?ｃｅｌｌｓ．??３．４?ＥＰＳ１－１对Ｕ８７ＭＧ细胞内自噬相关基因表达的影响??细胞内自噬相关基因（ＡＴＧ）涉及对自噬活性的调控。为了进一步研宄??ＥＰＳ１－１对细胞内自嘍相关基因表达的影响，使用ＲＴ－ｑＰＣＲ实验分析了?ＥＰＳ１－１??处理Ｕ８７ＭＧ细胞４８ｈ后，细胞内６个参与自噬过程的基因表达的变化。ＵＬＫ１??是参与自噬早期调节的基因，对于诱导自嗟是必须的［２７］。Ｂｅｃｌｉｎｌ调节自噬，能??够促进该过程的起始。研宄发现：与对照组相比
【参考文献】：
期刊论文
[1]Traditional Chinese herbal extracts inducing autophagy as a novel approach in therapy of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Cong Liu,Jia-Zhi Liao,Pei-Yuan Li. World Journal of Gastroenterology. 2017(11)
[2]细胞自噬的研究方法[J]. 马泰,孙国平,李家斌. 生物化学与生物物理进展. 2012(03)
[3]Modulating autophagy:a strategy for cancer therapy[J]. Jun-Lin Li1,Shao-Liang Han2 and Xia Fan3 1Department of General Surgery,The Central Hospital of Yongzhou City,Yongzhou,Hunan 425000,P.R.China;2Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou,Zhejiang 325000,P.R.China;3State Key Laboratory of Trauma,Burns,and Combined Injury;Research Institute of Surgery,Daping Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400042,P.R.China.. 癌症. 2011(10)
[4]Inhibitory activity of polysaccharide extracts from three kinds of edible fungi on proliferation of human hepatoma SMMC-7721 cell and mouse implanted S180 tumor[J]. JlANG Shi-Ming; XlAO Zheng-Ming and XU Zhao-Hui (Biology Department,Shandong Normal University, Jinan 250014, Shandong Province,China). World Journal of Gastroenterology. 1999(05)
本文编号：3296469
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