尼莫地平对TMEM16A/CaCC氯离子通道的抑制作用的分子药理学机制研究

发布时间：2021-07-22 06:51

　　尼莫地平作为一种生物碱类钙通道阻滞剂,常被应用于脑血管痉挛、蛛网膜下腔出血等心脑血管疾病的治疗。尼莫地平的主要生理学活性是调节细胞内钙水平,有选择性的扩张脑血管,以保护脑细胞能够促进记忆。尼莫地平对外周血管具有轻微的扩张作用,从而达到降低血压的作用。由于尼莫地平能够抑制Ca²⁺内流从而降低细胞内Ca²⁺浓度,而细胞TMEM16A氯离子通道活性与细胞Ca²⁺浓度密切相关,Ca²⁺浓度降低会导致TMEM16A氯离子通道活性的降低。近年来研究发现TMEM16A氯离子通道在生物体内参与许多重要的生理功能,如上皮液体转运、平滑肌收缩、嗅觉传导等。因此我们推测尼莫地平的降压作用可能与其抑制TMEM16A氯离子通道活性有关。本研究中,我们利用了稳定共转染人TMEM16A和对卤族元素高度敏感的绿色荧光蛋白突变体YFP-H148Q/I152L的Fischer大鼠甲状腺上皮（FRT）细胞系建立的功能测定荧光模型（FRT/TMEM16A/YFP-H148Q/I152L）和短路电流实验,分析了尼莫地平对TMEM16A氯离子... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TMEM16A的结构图

图 1.2 尼莫地平的分子结构Fig.1.2 Molecular structure of nimodipine滞剂，尼莫地平具有抗缺血、抗血管收缩的研究阐明在机体出现脑组织缺血、缺氧、中生超载现象，这时线粒体与内质网会释放大离子的大量聚集会导致血小板聚集，使血液莫地平的亲脂性特性，对于血脑屏障能够轻与预防蛛网膜下腔出血、脑血管痉挛等。W脑出血患者给药后能够明显降低其外周脑水调节胞内钙水平，使其能够正常行使其功能细胞能够促进记忆；还能轻微扩张外周血管目的及意义能够抑制钙离子内流从而降低平滑肌细胞内

图 2.1 TMEM16A/CaCC 抑制剂的细胞荧光测定模型Fig.2.1 Cellular fluorescence assay of TMEM16A/CaCC inhibitor2.2.3 细胞内钙离子浓度测定方法用 25 cm2培养瓶培养 HT-29 细胞，待其长满后消化并接种到 96 孔黑板中（密度约为 2×104cells/well），将 96 孔黑板在二氧化碳培养箱中放置培养 48 h 至细胞汇合。使用外用 PBS 清洗 2 次，之后在每孔中加入 100 μL/孔的 Fluo-4 NW荧光染料加载溶液，放入培养箱中孵育 30 min，之后加入需要浓度的待测药物，再置于培养箱中孵育10 min，将96孔黑板移到设备FLUOstar中继续孵育20 min，之后开始测定Fluo-4的荧光值。刺激细胞内Ca2+的释放的ATP的浓度为200 μM。2.2.4 短路电流测定方法（1）荧光 FRT-TMEM16A 细胞短路电流测定方法将荧光 FRT-TMEM16A 细胞在 25 cm2的培养瓶中进行培养，细胞长满后进行消化并接种到 snapwell 插孔中（密度约为 5×105cells/well，插孔内加入 500 μL细胞悬液，孔板内加入 1500 μL 培养液），每两天进行一次换液，连续培养 7~9

【参考文献】：
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本文编号：3296668