抑制自噬增强睾丸癌I-10/DDP细胞对顺铂的敏感性

发布时间：2021-07-22 06:34

　　目的:1.观察自噬水平在睾丸癌细胞对顺铂耐药中的变化。2.明确自噬在睾丸癌细胞对顺铂耐药产生中的作用。方法:1.Western blotting法检测细胞内LC3、p62、Atg5、Atg7蛋白表达。2.mCherry-GFP-LC3B质粒转染检测细胞自噬水平。3.透射电子显微镜观察自噬体。4.MTT法检测细胞存活。5.PI单染法检测细胞死亡。6.集落克隆法检测细胞克隆形成能力。7.shRNA转染对自噬相关基因atg5、atg7进行干扰,G418筛选培养基建立稳转株。8.统计学方法:采用SPSS 16.0统计软件进行相关实验数据资料的分析,实验结果以均数±标准差（Mean±SD）表示,两组之间均数比较采用两样本t检验,两组以上均数比较采用单因素方差（One-way ANOVA）分析和SNK-q检验。统计图表采用GraphPad Prism 5.0绘制,P<0.05差异具有统计学意义。结果:1.使用顺铂处理后,耐顺铂睾丸癌细胞I-10/DDP中自噬水平增加,而在亲代睾丸癌细胞I-10中自噬水平无明显变化。Western blotting结果显示相比于亲代睾丸癌细胞I-10,耐顺铂睾... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

顺铂处理后I-10和I-10/DDP细胞内LC3和p62的蛋白表达情况

22图 2 顺铂处理后 I-10 和 I-10/DDP 细胞内自噬流情况。Fig.2 DDP induced autophagic flux in I-10/DDP cells. (A) Cells were treated with control solvent (Pfor 12 h, and analyzed by transmission electron microscopy (original magnification: ×15000transfected with a mCherry-GFP-LC3B plasmid for 48 h, followed bycontrol solvent (PBS) or DDPfor 12 h. LC3 puncta was observed with confocal fluorescent microscopy (original magnifiexperiments were performed in triplicate.

激光共聚焦显微镜观察发现顺铂与氯喹合用组细胞内红色和绿色荧光亮点较单用顺铂组细胞中增加，同时在红色荧光和绿色荧光合成的图像中黄色荧光亮点（自噬体）和红色荧光亮点（自噬溶酶体）均增加（图3B）。由此可见，氯喹可以抑制顺铂介导的自噬过程，使细胞内的自噬体产生蓄积。

【参考文献】：
期刊论文
[1]两种方法建立的睾丸癌顺铂耐药细胞株的比较[J]. 李贝贝,董淑英,樊宗兵,吴小祥,巫剑峰,童旭辉.  南方医科大学学报. 2015(12)



本文编号：3296642