二氢杨梅素增强阿霉素对肝癌细胞的抑制作用

发布时间：2021-07-23 05:02

　　目的研究二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）对阿霉素（adriamycin,DOX）在肝癌化疗中的增效作用并研究其可能作用机制。方法不同浓度DMY作用肝癌细胞系MHCC97H后,CCK-8法筛选无毒剂量的DMY,用无毒剂量的DMY联合不同浓度DOX作用MHCC97H细胞,CCK-8法检测细胞活力;Hoschest染色法测定细胞凋亡情况;通过蛋白质印迹法测定PTEN、p-AKT、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、裂解的caspase-3和裂解的caspase-9;合成特异性靶向PTEN基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定沉默PTEN基因的MHCC97H细胞,检测沉默PTEN后是否影响DMY联合DOX对肝癌细胞凋亡的诱导作用;通过裸鼠皮下肿瘤细胞注射法建立MHCC97H裸鼠异种移植模型,观察DMY联合DOX给药对体内肝癌生长的影响,Tunel法测定体内肝癌细胞凋亡,Ki-67和PTEN在移植瘤组织中的表达通过免疫组织化学法测定。结果无毒剂量的DMY与DOX联合应用能显著提高DOX对体外MHCC97H细胞的生长抑制和凋亡诱导作用;DMY联合DOX可上调体外肝癌MHCC9... 

【文章来源】：沈阳药科大学学报. 2020,37(06)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

DMY单独(A)及联合DOX(B)对体外MHCC97H细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

分别用不同浓度DMY(1、2.5、5、10、25、50、100 μmol·L-1)培养MHCC97H细胞24 h,CCK-8法检测细胞活力,结果表明DMY对体外肝癌细胞的生长抑制呈浓度依赖关系(图1A),10 μmol·L-1的DMY对约90%的细胞没有明显的毒性,表明浓度不超过10 μmol·L-1的DMY对细胞生长没有影响,因此本研究作者选择10 μmol·L-1的DMY进行后续实验。如图1B所示,与单用不同浓度的DOX溶液(0.25、0.5、1、2、5、10、25、50、100 μmol·L-1)相比较,浓度为 10 μmol·L-1 DMY溶液和DOX联合应用会提高MHCC97H细胞对DOX的敏感性,DOX与DMY联合作用的IC50值和DOX单药治疗的IC50值分别为11.373 μmol·L-1和3.636 μmol·L-1。此外,浓度10 μmol·L-1 DMY溶液联合浓度2 μmol·L-1DOX溶液作用后细胞存活率较单独使用DOX显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),因此选择浓度为2 μmol·L-1的DOX溶液用于本研究后续实验。3.2 DMY联合DOX对MHCC97H细胞的凋亡诱导作用

通过Hosches 33342染色的细胞在荧光显微镜下观察到的形态学特征如图2所示,在荧光显微镜下观察到正常MHCC97H细胞发出均匀蓝色荧光,而凋亡细胞中可见核浓缩和染色体凝集,呈亮蓝色荧光,在荧光显微镜下统计每200×视野下的凋亡细胞比例。对照组细胞凋亡率为(4.7±1.2)%,浓度10 μmol·L-1的DMY溶液或浓度2 μmol·L-1DOX溶液作用后可见MHCC97H细胞核发生波纹状改变,部分染色质出现浓缩和边缘化,诱导的细胞凋亡率分别为(6.3±1.4)%和(13.6±2.4)%,DOX组的细胞凋亡率较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,DMY和DOX联合治疗组可见较多MHCC97H细胞核发生裂解并形成凋亡小体,细胞凋亡率为(22.8±4.1)%,与DOX组相比较有统计学差异(P<0.05),表明DMY联合DOX可显著诱导体外MHCC97H细胞凋亡。3.3 DMY通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路增强MHCC97H细胞对DOX的敏感性


本文编号：3298653