微流控芯片毛细管电泳法在酶法工艺青霉素类产品中残留蛋白检测的应用探讨

发布时间：2021-08-01 03:00

　　目的:蛋白残留量是影响酶法工艺生产半合成类抗生素的关键质量属性之一,它不仅影响药品质量,还会威胁人用药安全。本文尝试采用微流控芯片毛细管电泳（microfluidic chip-based capillary electrophoresis,MCCE）技术对青霉素类产品中的蛋白残留量进行分析和测定,并对MCCE法的影响因素和测定准确性进行了探讨。方法:以酶法工艺典型青霉素类药品-阿莫西林为例,采用Agilent高灵敏蛋白250型试剂盒分别对催化酶蛋白和阿莫西林样品进行前处理,再将处理后的溶液上样至蛋白芯片（5 cm×5 cm×0.8 cm）,最后采用Agilent生物分析仪2100进行分析与检测。该法蛋白分子量检测范围为10～250 kDa;分析时间为30 min;样品量为9μL。结果:牛血清白蛋白（BSA）在5～500 ng·mL^-1（r=0.99,n=4）的浓度范围内线性关系良好;蛋白分子量测定准确度约为100.6%（n=4×7）,不同浓度BSA在阿莫西林溶液中得到的加标回收标准曲线与BSA标准曲线之间没有显著性差异（P=0.28> 0.05,n=4）,... 

【文章来源】：中国新药杂志. 2020,29(15)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

阿莫西林酶法工艺合成路线图

ladder标准液用于分子量定位和相对定量，采用纳克级测定法(nano labeling protocol)进行溶液前处理和分析测定;阿莫西林供试品溶液、PGA、BSA采用皮克级测定法(pico labeling protocol)进行溶液前处理和分析测定，见图2。4 溶液的配制

取空白溶剂(2)、ladder、BSA和PGA溶液按照“3”项测定法进行分析，记录电泳图谱，结果显示在分子量为10～250 k Da范围内，空白溶剂无干扰峰产生。其中，低分子量标记蛋白(5 k Da)为试剂盒样品缓冲液(sample buffer)所含内标，用于检测蛋白起始排列定位(见图3A);ladder分析结果显示，7个不同分子量大小的标准蛋白(分别为15.0,28.0,46.0,63.0,95.0,150.0和240.0 k Da)之间具有较好的分离度(R≥2.0),ladder标准液用于样品中不同检出蛋白的定位与相对定量目的(见图3B);对BSA进行分析结果显示，其主要组分蛋白分子量约为69 k Da(纯度约为95.1%)，高浓度下可见其还含有一个小组分蛋白(分子量约为133 k Da),BSA用于标准曲线的制备和绝对定量目的(见图3C);对PGA纯化液进行分析结果显示，其主要含有3种不同分子量的蛋白(约为27,35和58 k Da)，其中分子量为58 k Da的蛋白为主要组分，PGA用于对样品中残留蛋白定性目的(见图3D)。2线性关系

【参考文献】：
期刊论文
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[2]阿莫西林克拉维酸钾复方制剂中聚合物杂质的分析[J]. 李进,张培培,崇小萌,姚尚辰,胡昌勤.  药物分析杂志. 2017(08)
[3]化学药品杂质谱控制的现状与展望[J]. 胡昌勤.  中国新药杂志. 2015(15)
[4]凝胶过滤色谱和Bradford法测定发酵类抗生素中蛋白残留量（英文）[J]. 许明哲,马仕洪,胡昌勤.  Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2004(04)



本文编号：3314704