熊果酸通过SIRT1/Atg5激活自噬对ox-LDL诱导HUVECs氧化损伤的保护作用

发布时间：2021-08-01 22:47

　　目的:复制ox-LDL（100μg/ml）诱导的HUVECs氧化损伤模型,并从熊果酸通过Sirt1/Atg5上调自噬抵抗ox-LDL所致HUVECs氧化应激的角度探讨其保护作用机制。方法:以体外培养的HUVECs为实验对象,建立细胞氧化损伤模型,并筛选出熊果酸最佳预保护时间及作用浓度。实验分组如下:正常对照组,模型组,熊果酸组,模型+熊果酸组,模型+维生素E组、自噬抑制剂3-MA组及Sirt1抑制剂EX-527组。采用CCK-8法检测各组细胞存活率;化学酶法检测细胞H2O2、MDA、SOD、NO及NOS水平;透射电镜观察细胞超微结构;ESR自旋捕捉技术同时定量检测NO及ROS的释放量;Western blotting检测Sirt1、LC3B、p62、Atg5蛋白表达;免疫沉淀法检测乙酰化Atg5蛋白。结果:复制了ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型;模型组细胞SOD、NOS、NO水平下降,MDA、H2O2含量增多;而加入5-20μM熊果酸预保护16h后,细胞存活率、SOD、NOS、NO水平上升,MDA、H2O2产生减少,且呈剂量依赖性（P<0.05）。透射电镜观察细胞超微结... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料
    1.1 细胞株
    1.2 主要试剂和材料
    1.3 主要仪器设备
第二章 实验方法
    2.1 人脐静脉内皮细胞的传代培养、冻存与复苏
        2.1.1 HUVECs的传代培养
        2.1.2 HUVECs的冻存与复苏
    2.2 实验分组与处理
        2.2.1 ox-LDL氧化损伤模型的建立
        2.2.2 熊果酸细胞毒性筛选
        2.2.3 熊果酸预保护时间及浓度筛选
        2.2.4 实验分组设计
    2.3 实验方法与检测指标
        2.3.1 熊果酸对氧化损伤后HUVECs细胞生存率的影响
        2.3.2 3-MA及EX-527对ox-LDL损伤的HUVECs细胞生存率的影响
        2.3.3 SOD、MDA、NOS、NO、H2O2测定
        2.3.4 透射电镜
        2.3.5 电子自旋共振（ESR）检测各组细胞NO及ROS释放量
        2.3.6 免疫印迹法（Western Blotting）检测Sirt1、LC3B、p62、Atg5蛋白
        2.3.7 免疫沉淀法（Immunoprecipitation, IP）检测乙酰化Atg5蛋白
    2.4 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 ox-LDL造模浓度的筛选结果
    3.2 熊果酸细胞毒性的筛选结果
    3.3 熊果酸预保护时间及浓度筛选
    3.4 熊果酸对氧化损伤后HUVECs细胞生存率的影响
    3.5 熊果酸对ox-LDL损伤的HUVECs中H2O2、SOD及MDA的影响
    3.6 熊果酸对ox-LDL损伤的内皮细胞中NO及NOS的影响
    3.7 熊果酸对ox-LDL损伤的内皮细胞自噬水平的影响
    3.8 熊果酸对Sirt1蛋白表达的影响
    3.9 3-MA及EX-527对ox-LDL损伤的HUVECs细胞生存率的影响
    3.10 电子自旋共振（ESR）检测HUVECs内NO及ROS释放量
    3.11 熊果酸通过Sirt1激活自噬保护ox-LDL损伤的HUVECs
    3.12 自噬相关基因Atg5乙酰化蛋白表达水平检测
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3316381