肝靶向肽-抗肿瘤肽在大肠杆菌中诱导表达的相关条件优化研究

发布时间：2021-08-07 17:17

　　目的:优化重组蛋白肝靶向肽-抗肿瘤肽（CSP-MDA-7/IL-24）在原核表达系统中的培养条件,并提高其蛋白的表达量。方法:对重组质粒在菌株BL21中的生长情况进行检查,确定合适的诱导时机;通过单因素试验,优化适合重组蛋白最大化表达的培养条件;并在此基础上设计4个因素5个检测水平的正交实验,从而确定最佳诱导重组蛋白表达的条件组合。结果:在pH为7,IPTG浓度为0.15 mmol·L^-1,温度为42℃、诱导时间为4 h时,重组蛋白表达百分比达到最大值。此外,分析显示在所研究的培养条件中,温度对重组蛋白表达水平的影响最为显著。结论:本研究结果为扩大重组蛋白CSP-MDA-7/IL-24的生产提供了数据支持,并为后期CSP-MDA-7/IL-24的生物学研究提供了研究材料。 

【文章来源】：药物分析杂志. 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

表达重组质粒p ET21b-CSP-MDA-7/IL-24的菌株的生长曲线

图1 表达重组质粒p ET21b-CSP-MDA-7/IL-24的菌株的生长曲线分析IPTG的浓度对重组蛋白表达的影响发现，在固定诱导4 h的情况下，0.1 mmol·L-1 IPTG已经能够诱导重组蛋白的表达。该表达量在IPTG浓度为0.15 mmol·L-1时达到最高，占总蛋白量的25%（图3）。但IPTG浓度的进一步增加却并不能继续提高重组蛋白的表达量。

温度检测结果显示在17℃时，重组蛋白的表达量低于SDS-PAGE可检测到的最小值。在室温下（22℃），IPTG就能够诱导重组蛋白的表达。随着温度的升高，蛋白的表达量也逐渐增多，并在42℃时达到最高，为总蛋白表达量的55%（图5）。图4 p H对重组蛋白表达的影响

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3328204