阿托伐他汀通过溶酶体—线粒体轴抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的机制
发布时间：2021-08-16 09:38
目的:肾素-血管紧张素系统在诸如高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展过程中发挥着重要作用。血管紧张素II（Angiotensin II,Ang Ⅱ）是肾素-血管紧张素系统主要的活性肽物质,与内皮细胞紊乱、血管重塑以及血管炎症密切相关,促进高血压和动脉粥样硬化的进程。他汀类药物如阿托伐他汀能够通过维持内皮细胞功能、抗氧化应激和促进血管一氧化氮的释放进而发挥抗高血压的作用。凋亡是一种进化上保守的机制,能够通过两种途径被激活,即内源性途径和外源性途径。内源性途径即线粒体依赖途径,细胞内外多种刺激因素能够触发凋亡信号,最终传递至线粒体。细胞凋亡涉及多个基因和细胞器的调控。在2006年,Terman等人提出溶酶体-线粒体轴理论,目前关于这一理论在凋亡中的作用研究较少。本研究主要探讨Ang Ⅱ能否通过溶酶体-线粒体轴促进人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）凋亡,以及阿托伐他汀能否通过稳定溶酶体来抵抗Ang Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡。研究方法:1、培养HUVECs,分别用不同浓度（0μM、0.1μM、1μM、10μM和100...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阿托伐他汀削弱AngII诱导的HUVECs凋亡
阿托伐他汀对 Ang II 诱导的线粒体功能紊乱的保护作用细胞用 1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理 24 h。线粒体膜电位用 TMRE（Ex/Em:549/573 nm）染色实验检测并用荧光显微镜分析（标尺: 20 μm）（a）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em:485/530 nm）染色实验检测并用荧光显微镜分析（标尺: 20 μm）（b）。线粒体膜电位用 TMRE（Ex/Em: 549/573 nm）染色实验检测并用酶标仪分析（c）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em: 485/530nm）染色实验检测并用酶标仪分析（d）。分别提取细胞质蛋白和总蛋白检测细胞色素 c 表达。细胞色素氧化酶亚基 IV（COXIV）作为线粒体标记物，来判断细胞质蛋白是否纯（e）。Westernblot 条带用 Image J 1.47 量化，GAPDH 作为内参，对照组量化为 1（f）。所有结果均来自至少三次独立重复试验，以均值±标准差表示。*p<0.05 表示与对照组比有统计学差异，#p<0.05 表示与 Ang II 处理组比有统计学差异。3.3 Ang II 诱导的线粒体功能紊乱与溶酶体功能紊乱的时序关系AO 染色实验和 lysotracker 染色实验用于评估溶酶体膜稳定性。正常溶酶体内
染料所发出的荧光减弱。1 μMAng II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理细胞 24 h 后，在Ang II 处理组，AO 所激发出的红色荧光减弱，且在细胞内的分布弥散，表明溶酶体膜稳定性下降；阿托伐他汀能够显著逆转AngII引起的溶酶体膜不稳定（图3A）。1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理细胞 24 h 后，在 Ang II 处理组，Lysotracker所激发出的红色荧光减弱，表明溶酶体膜稳定性下降；阿托伐他汀能够显著逆转AngII 引起的溶酶体膜不稳定；酶标仪量化结果与荧光显微镜下结果一致（图 3 B&C）。接下来我们研究溶酶体膜稳定性与线粒体稳定性之间的时序关系。Lysotracker 是用来标记酸性细胞器，主要进入溶酶体，其激发发射波长为 Ex/Em:577/590nm；TMRE对线粒体具有高度选择性，用来标记线粒体，其激发发射波长为 Ex/Em:549/573nm。两种染料标记细胞后，分别用酶标仪检测 OD 值，对其进行量化分析。1 μMAng II处理细胞 24h 后
【参考文献】：
期刊论文
[1]Effect of Mouse Oocyte Vitrification on Mitochondrial Membrane Potential and Distribution[J]. 雷涛,郭娜,谭美华,李豫峰. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2014(01)
[2]Molecular mechanism and regulation of autophagy[J]. Ya-ping YANG~2 Zhong-qin LIANG~2 Zhen-lun GU~2 Zheng-hong QIN~(2,3) 2 Department of Pharmacology,Soochow University School of Medicine,Suzhou 215007,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(12)
本文编号：3345433
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阿托伐他汀削弱AngII诱导的HUVECs凋亡
阿托伐他汀对 Ang II 诱导的线粒体功能紊乱的保护作用细胞用 1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理 24 h。线粒体膜电位用 TMRE（Ex/Em:549/573 nm）染色实验检测并用荧光显微镜分析（标尺: 20 μm）（a）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em:485/530 nm）染色实验检测并用荧光显微镜分析（标尺: 20 μm）（b）。线粒体膜电位用 TMRE（Ex/Em: 549/573 nm）染色实验检测并用酶标仪分析（c）。ROS 用 DCFH-DA（Ex/Em: 485/530nm）染色实验检测并用酶标仪分析（d）。分别提取细胞质蛋白和总蛋白检测细胞色素 c 表达。细胞色素氧化酶亚基 IV（COXIV）作为线粒体标记物，来判断细胞质蛋白是否纯（e）。Westernblot 条带用 Image J 1.47 量化，GAPDH 作为内参，对照组量化为 1（f）。所有结果均来自至少三次独立重复试验，以均值±标准差表示。*p<0.05 表示与对照组比有统计学差异，#p<0.05 表示与 Ang II 处理组比有统计学差异。3.3 Ang II 诱导的线粒体功能紊乱与溶酶体功能紊乱的时序关系AO 染色实验和 lysotracker 染色实验用于评估溶酶体膜稳定性。正常溶酶体内
染料所发出的荧光减弱。1 μMAng II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理细胞 24 h 后，在Ang II 处理组，AO 所激发出的红色荧光减弱，且在细胞内的分布弥散，表明溶酶体膜稳定性下降；阿托伐他汀能够显著逆转AngII引起的溶酶体膜不稳定（图3A）。1 μM Ang II 和/或 10 μM 阿托伐他汀处理细胞 24 h 后，在 Ang II 处理组，Lysotracker所激发出的红色荧光减弱，表明溶酶体膜稳定性下降；阿托伐他汀能够显著逆转AngII 引起的溶酶体膜不稳定；酶标仪量化结果与荧光显微镜下结果一致（图 3 B&C）。接下来我们研究溶酶体膜稳定性与线粒体稳定性之间的时序关系。Lysotracker 是用来标记酸性细胞器，主要进入溶酶体，其激发发射波长为 Ex/Em:577/590nm；TMRE对线粒体具有高度选择性，用来标记线粒体，其激发发射波长为 Ex/Em:549/573nm。两种染料标记细胞后，分别用酶标仪检测 OD 值，对其进行量化分析。1 μMAng II处理细胞 24h 后
【参考文献】：
期刊论文
[1]Effect of Mouse Oocyte Vitrification on Mitochondrial Membrane Potential and Distribution[J]. 雷涛,郭娜,谭美华,李豫峰. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2014(01)
[2]Molecular mechanism and regulation of autophagy[J]. Ya-ping YANG~2 Zhong-qin LIANG~2 Zhen-lun GU~2 Zheng-hong QIN~(2,3) 2 Department of Pharmacology,Soochow University School of Medicine,Suzhou 215007,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2005(12)
本文编号：3345433
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