HDAC抑制剂及HDAC1siRNA对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT的影响

发布时间：2017-04-29 19:16

  本文关键词：HDAC抑制剂及HDAC1siRNA对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【背景与目的】组蛋白乙酰化是在组蛋白乙酰基转移酶(Histone acetyltransferases,HATs)催化下将acetyl Co A的乙酰基转移到组蛋白赖氨酸ε位的氨基上,在组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases,HDACs)催化下可以去掉赖氨酸的乙酰基,在这两种酶的调节下组蛋白的乙酰化和去乙酰化呈动态可逆的过程。而组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone deacetylase inhibitors,HDACis)以HDACs为治疗靶点,可通过调节细胞组蛋白和非组蛋白的乙酰化水平而调控基因的表达,促使细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡等多种生物学效应,从而抑制肿瘤细胞增殖,增强肿瘤对一些化疗药物的敏感性。最近研究表明,HDAC与以纤维化为特征的慢性疾病发展相关,包括慢性肾脏疾病、心肌肥厚和特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)。目前国内外越来越多的研究证明,肺泡上皮间质转化在肺纤维化的发病机制中起着重要的作用,阻止EMT的发生,可以减轻甚至逆转成肌纤维细胞(Myofibroblast,MFb)的聚集,有望在早期逆转纤维化的发生,从而改善肺纤维化病人的预后。研究发现,HDAC的抑制剂(Histone deacetylase inhibitors,HDACis)-Trichostatin A(TSA)可改善心、肝、肾及皮肤的纤维化,并且应用此抑制剂对正常肝及肾小管细胞几乎无毒性。而HDACis是否能抑制肺上皮间质转化及肺纤维化,其在肺纤维化中的具体作用及机制又是怎样的,目前均未见明确的报道。本课题组前期研究已经证明TGF-β1在体外细胞培养过程中能够诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(Rat lung epithelium-6TN,RLE-6TN)发生EMT,并且HDAC1参与了TGF-β1诱导的RLE-6TN的EMT过程;本研究通过在体外培养的大鼠RLE-6TN中分别加入HDAC抑制剂和HDAC1si RNA,同时加入外源性TGF-β1,观察其对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞HDAC1、8和E-cad、α-SMA的表达情况,明确抑制HDAC1、8表达对RLE-6TN的保护及阻抑肺纤维化的作用机制。【材料和方法】在体外培养RLE-6TN的过程中,分别采用HDAC1抑制剂TSA及设计、合成HDAC1si RNA,同时加入外源性TGF-β1,采用Real-time RT-PCR及Western Blot检测HDAC1、HDAC8、上皮细胞特异性标志物(E-cad)及间质细胞特异性标志物(α-SMA)的表达情况,倒置相差显微镜观察TSA及HDAC1si RNA对RLE-6TN细胞形态的影响,Transwell小室检测其对RLE-6TN细胞体外迁移能力的影响,免疫荧光检测其对RLE-6TN细胞的HDAC1、8、E-cad及α-SMA的表达及定位情况,【结果】与空白对照组相比,经TSA预处理6h,TGF-β1处理6h时α-SMA m RNA的表达降低(P0.05),E-cad于6h、12h表达上调(虽无明显统计学意义),HDAC8m RNA于24h、48h表达下调(虽无明显的统计学意义),HDAC1m RNA表达下调(P0.01);与空白对照组相比,经TSA作用后,HDAC1、8蛋白和α-SMA蛋白表达均下调,E-cad蛋白表达上调;Transwell小室检测发现与空白对照组相比,经TGF-β1作用后穿过微孔膜的细胞数目(20×和40×)明显增多(P0.01),经TSA和TGF-β1共同作用后穿过微孔滤膜的细胞数目(20×和40×)明显减少(P0.01);RLE-6TN细胞经HDAC1 si RNA和TGF-β1共同作用后HDAC1、8m RNA的表达明显降低(P值均0.01);RLE-6TN细胞经HDAC1 si RNA和TGF-β1共同作用后HDAC1蛋白的表达明显降低(P0.01);Transwell小室检测发现加入HDAC1si RNA后的结果同TSA处理后的结果;免疫荧光检测发现,与空白对照组相比,TGF-β1组E-cad蛋白表达减弱;与空白对照组比较,TGF-β1组α-SMA蛋白表达增强,加入TSA后其表达减弱;与对照组、TSA组及TSA+TGF-β1组)比较,TGF-β1组HDAC1蛋白表达增强,定位于细胞核;HDAC1si RNA组各标志物及HDAC1、8蛋白表达同TSA处理后的结果;与不加TGF-β1组及TSA预处理组相比,加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后48h,其细胞间隙变大,离散成单个,形态成梭形、纺锤形,TSA预处理6h后添加TGF-β1到RLE-6TN细胞后48h,细胞间隙小,细胞趋于融合成片;HDAC1si RNA组细胞形态的改变同TSA处理组。【结论】在体外培养的RLE-6TN细胞中,HDAC抑制剂TSA及HDAC1si RNA干扰可抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型,从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡上皮EMT。
【关键词】：组蛋白去乙酰化酶抑制剂 上皮细胞间质转变 HDAC1siRNA干扰 肺纤维化 TGF-β1
【学位授予单位】：大理学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 英文缩略语注释4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-48
• 讨论48-53
• 结论与展望53-54
• 参考文献54-60
• 攻读学位期间发表的学术论文60
• 文献综述60-68
• 参考文献65-68
• 致谢68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吕琳;吴少瑜;饶进军;;组蛋白乙酰转移酶和去乙酰化酶的研究[J];现代医院;2008年04期

  本文关键词：HDAC抑制剂及HDAC1siRNA对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT的影响，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：335465