3种诱导剂对大鼠肝脏CYP2E1表达及肝损伤相关酶的影响

发布时间：2017-04-29 22:21

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【摘要】：CYP2E1为CYP450酶家族中重要成员之一，其主要功能是代谢小分子化合物。CYP2E1的底物多为前毒物或前致癌物，经其代谢后可产生毒性效应，因此关于CYP2E1的研究在药物毒理学方面具有重要意义。咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚是CYP2E1代谢底物中的不同类型小分子化合物，可影响CYP2E1的表达或酶的活性。本研究探讨咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚在24h内对CYP2E1表达的调控以及对肝脏损伤的作用，为探索CYP2E1的毒性机制奠定理论基础。 180只SD雄性大鼠随机分为三个批次进行咪唑、对乙酰氨基酚、吡唑对大鼠的诱导实验。咪唑的60只大鼠分为空白对照组和低、中、高浓度药物组，每组15只，腹腔注射给药后，分别在1h、6h和24h每组随机选取5只大鼠，采血并分离肝脏，-80℃保存备用。对乙酰氨基酚和吡唑分组与咪唑相同。应用qRT-PCR测定大鼠肝脏CYP2E1mRNA的表达水平，Western Blot法测定CYP2E1的蛋白表达量，紫外分光光度计法测定CYP2E1的酶活性，比色法测定血浆或肝脏中6种酶的变化。 实验结果表明，，3种药物对CYP2E1mRNA表达水平无显著影响（P0.05）。与对照组比较，在1h和6h咪唑组大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性无显著变化，24h则明显升高且呈现剂量依赖性；在1h、6h吡唑组大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性显著升高（P0.05），24h下降并恢复正常；对乙酰氨基酚组的大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达量则与给药剂量和给药时间呈剂量依赖性，而酶活性只在24h显著升高。3种药物都引起血浆中AST、ALT、ALP酶活性的升高，肝组织中GSH、SOD酶活性的降低以及MDA含量的升高。 综上所述，在24h内，咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚对CYP2E1的诱导作用主要是通过影响CYP2E1的蛋白表达量及酶活性，而不是调节CYP2E1mRNA表达量。但各种药物对大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性的影响存在时间上的差异。咪唑及吡唑高剂量在24h引起大鼠肝脏轻度损伤，对乙酰氨基酚对肝脏损伤程度则呈现剂量时间依赖性。
【关键词】：CYP2E1 咪唑 吡唑 对乙酰氨基酚 肝脏
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 符号说明6-10
• 第一章 文献综述10-20
• 1.1 细胞色素 P45010-13
• 1.1.1 CYP450 分布10
• 1.1.2 CYP450 功能10-12
• 1.1.3 CYP450 分类12
• 1.1.4 CYP450 诱导及抑制12-13
• 1.2 细胞色素 P4502E113-18
• 1.2.1 CYP2E1 发现史13-14
• 1.2.2 CYP2E1 功能14
• 1.2.3 CYP2E1 分布及蛋白结构14-15
• 1.2.4 CYP2E1 底物分类及探针15-16
• 1.2.5 CYP2E1 基因多态性16-17
• 1.2.6 CYP2E1 诱导剂和抑制剂17-18
• 1.3 研究目的与意义18-20
• 第二章 诱导物对大鼠肝脏 CYP2E1 mRNA 的影响20-30
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 实验动物20
• 2.1.2 实验药品与试剂20
• 2.1.3 实验仪器20-21
• 2.1.4 主要溶液的配制21
• 2.2 实验方法21-24
• 2.2.1 动物分组及给药21
• 2.2.2 提取大鼠肝脏总 RNA21-22
• 2.2.3 mRNA 反转录成 cDNA22
• 2.2.4 克隆测序验证引物22-23
• 2.2.5 实时荧光定量 PCR 检测23-24
• 2.2.6 数据分析24
• 2.3 实验结果24-27
• 2.3.1 RNA 完整性24
• 2.3.2 梯度 PCR24-25
• 2.3.3 胶回收电泳25
• 2.3.4 测序结果25
• 2.3.5 荧光定量 PCR 检测结果25-27
• 2.4 讨论27-30
• 第三章 诱导物对大鼠肝脏 CYP2E1 的影响30-44
• 3.1 实验材料30-33
• 3.1.1 实验动物30
• 3.1.2 实验药品与试剂30
• 3.1.3 实验仪器30
• 3.1.4 主要溶液的配制30-33
• 3.2 实验方法33-36
• 3.2.1 实验动物分组及给药33
• 3.2.2 BCA 法测蛋白浓度33-34
• 3.2.3 Western Blot 检测 CYP2E1 蛋白表达34-36
• 3.2.4 CYP2E1 活性测定36
• 3.2.5 统计学分析36
• 3.3 实验结果36-41
• 3.3.1 CYP2E1 活性测定标准曲线36-37
• 3.3.2 咪唑对大鼠肝脏 CYP2E1 蛋白表达及酶活性的影响37-38
• 3.3.3 吡唑对大鼠肝脏 CYP2E1 蛋白表达及酶活性的影响38-39
• 3.3.4 对乙酰氨基酚对大鼠肝脏 CYP2E1 蛋白表达及酶活性的影响39-41
• 3.4 讨论41-44
• 第四章 诱导物对大鼠血浆及肝组织中酶的影响44-56
• 4.1 实验材料44
• 4.1.1 实验动物44
• 4.1.2 实验药品与试剂44
• 4.1.3 实验仪器44
• 4.2 实验方法44-46
• 4.2.1 肝组织匀浆与血浆制备44
• 4.2.2 血浆及肝组织中酶的检测44-46
• 4.3 实验结果46-53
• 4.3.1 咪唑对大鼠血浆及肝组织中酶的影响46-48
• 4.3.2 吡唑对大鼠血浆及肝组织中酶的影响48-50
• 4.3.3 对乙酰氨基酚对血浆及肝组织中酶的影响50-53
• 4.4 讨论53-56
• 第五章 结论56-58
• 参考文献58-68
• 致谢68-70
• 个人简历70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑波;黄海燕;刘建军;王晓梅;;CYP1A1、CYP2E1基因多态性与癌症易感性的研究进展[J];癌变·畸变·突变;2010年03期

2 刘雪艳;戴敏;;CYP2E1介导的脂质过氧化在脂肪性肝病发病机制中的作用[J];安徽医药;2007年02期

3 刘苏艳,刘毓谷,邱信芳,薛京伦;诱导物对大鼠细胞色素P450IIE1基因表达和活化的影响[J];复旦学报(自然科学版);1991年02期

4 王睿,向倩,陈

本文编号：335734