抗肿瘤药物靶蛋白:DUSP26和Tks4的结构与反应机制的研究

发布时间：2017-04-30 01:08

  本文关键词：抗肿瘤药物靶蛋白:DUSP26和Tks4的结构与反应机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：解析抗肿瘤药物作用靶蛋白的结构和功能的相互关系是开展抗肿瘤新药的筛选的前提。本项研究中开展了人体内的两个抗肿瘤药物靶点蛋白质：二重特异性去磷酸化酶26(Dual-specificity phosphatase 26,简称DUSP26)口Tks4的结构与功能研究。在本论文中,第一篇报道DUSP26的反应机制研究和利用计算机辅助药物筛选的DUSP26小分子抑制剂发现研究的结果,第二篇报道Tks4的C-端Src homology 3(SH3)结构域的晶体学研究结果。DUSP26是近期确定的抗甲状腺未分化癌等肿瘤药物作用的新靶标。作者的导师已经成功测定了DUSP26的催化结构域的晶体结构,但DUSP26的反应机理尚不明确。为了获得靶向DUSP26的抗肿瘤新药的先导化合物,本项研究首先利用对硝基苯磷酸为底物的酶促动力学开展DUSP26反应机制研究,从研究结果中获得可作为药物作用靶位后,利用计算机辅助设计技术构建了用于分子对接筛选的药效团模型,而后利用分子对接法从中国医学科学院／北京协和医学院医药生物技术研究所微生物来源天然化合物库和百灵威公司化合物库实施虚拟筛选,获得了232种候选化合物。以对硝基苯磷酸为底物,验证这些候选化合物的对DUSP26的抑制活性,从中发现了8种化合物具有抑制活性,其中的化合物2-hydroxy-4-{6-[(5Z)-5-[(4-methylphenyl)methylidene]-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl]hexanamido} ben zoic acid的抑制活性高于已知唯一的DUSP26的抑制剂NSC-87877。研究结果证明了本人推测的DUSP26反应机制的准确性,化合物可以作为靶向DUSP26的抗肿瘤药物先导化合物开展进一步的研究。人体内的抗肿瘤药物靶蛋白Tks4的空间结构尚不明确,为了解析它的结构和功能的相互关系,开展了Tks4的C端SH3结构域的晶体学研究。迄今为止,完成了这个结构域的大肠杆菌原核表达、纯化、结晶化和X射线衍射数据的测定,获得了Tks4的C端SH3结构域晶体的结晶学参数。为了获得晶体结构,利用同晶置换法的晶体结构研究正在开展。
【关键词】：二重特异性去磷酸化酶26 反应机理 计算机辅助药物筛选 人体内Tks4的C端 Src homology 3(SH3)结构域 晶体学研究
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R979.1
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 计量单位表5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 第一篇 二重特异性去磷酸化酶结构与反应机制研究9-55
• 第一章 文献综述9-16
• 1.1 计算机辅助药物筛选简介9-10
• 1.2 Dual-specificity phosphatase 26(DUSP26)的研究现状10-15
• 1.3 本研究的目的和意义15-16
• 第二章 DUSP26的药物作用靶位研究16-39
• 第一节 DUSP26及截断体表达质粒的构建18-27
• 1.1 材料与试剂18-19
• 1.2 实验方法19-26
• 1.3 实验结果与讨论26-27
• 第二节 蛋白的表达与纯化27-32
• 2.1 材料与试剂27
• 2.2 实验方法27-30
• 2.3 实验结果与讨论30-32
• 第三节 DUSP26酶动力学研究32-39
• 3.1 材料与试剂32
• 3.2 实验方法32-34
• 3.3 实验结果与讨论34-39
• 第三章 计算机辅助药物筛选和小分子抑制活性验证39-52
• 第一节 DUSP26抑制剂药效团模型的建立及虚拟筛选39-45
• 1.1 材料与方法39-40
• 1.2 结果与讨论40-45
• 第二节 候选化合物生物活性测试研究45-52
• 2.1 实验材料45
• 2.2 实验方法45-47
• 2.3 结果与讨论47-52
• 第一篇 研究结果52-53
• 参考文献53-55
• 第二篇 人体内Tks4蛋白质的C端SH3结构域初期蛋白质晶体学研究55-63
• 第一章 文献综述55-56
• 第二章 SH3结构域的表达、纯化、晶体化与X射线衍射数据收集56-61
• 2.1 蛋白表达与纯化56-57
• 2.2 蛋白质晶体的制备与X射线衍射数据的收集57-58
• 2.3 结果与讨论58-61
• 参考文献61-63
• 附录63-65
• 致谢65-66
• 作者简介66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 嵇汝运;漫谈药物学与计算机辅助药物设计[J];华东科技;1996年09期

2 袁身刚;;计算机辅助药物设计[J];科学;1995年05期

3 朱伟;陈可冀;徐筱杰;;计算机药物虚拟筛选技术在中医药领域中的应用前景[J];中国中西医结合杂志;2007年03期

4 史宁;韦林毅;吴久鸿;;小分子抗肿瘤蛋白激酶抑制剂的研究进展[J];中国药学杂志;2011年23期

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本文编号：335952