MG63细胞对载辛伐他汀纳米胶束摄取的高效液相色谱法测定

发布时间：2021-08-21 04:14

　　本实验旨在应用高效液相色谱（HPLC）法定量检测人成骨样细胞—MG63细胞对载辛伐他汀纳米胶束（SVNs）的摄取情况.首先,建立检测SVNs中SV含量的HPLC法,确定色谱条件,并对该方法的专属性与准确性进行评价.其次,将SVNs与辛伐他汀（SV）干预细胞,在加药后的不同时间终止实验,反复冻融破碎细胞,提取胞内药物并用HPLC法对其进行检测.结果显示,当流动相比例为30:70（V/V）时,定量检测SVNs中SV含量的标准曲线拟合方程为y=33782x-1424.5（R2=0.9999）,线性范围为0.2～3.2μg/mL.该方法专属性与准确性均较高,并成功检测出了被MG63细胞摄取到胞内的药物含量.同时,在加药早期,SVNs与SV相比,SVNs被MG63细胞摄取的速度较慢,但胞内药物含量显著高于SV,SVNs与SV被MG63细胞摄取存在显著差异. 

【文章来源】：深圳职业技术学院学报. 2020,19(05)

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【部分图文】：

SV标准品主成分峰保留时间

MG63细胞对SVNs和SV的摄取情况见图3．结果显示，在SVG中，MG63细胞对SV的摄入十分迅速，15 min时胞内药物浓度即达到最高峰．而MG63细胞对SVNs的摄入速度较慢，从30 min开始，MG63对载药胶束的摄入量才开始逐渐增多．SVNs被成骨细胞摄取速度较慢的原因可能与其粒径过小及表面未带电荷有关系．已有研究显示，载药纳米胶束的粒径、表面所带电荷情况等都可影响细胞对载药纳米胶束的摄取．有学者[17]报道载药纳米胶束的粒径在约50 nm时，其被细胞摄取的效率是最高的；而当纳米表面带正电荷时，可增加载药纳米胶束与细胞膜的吸附能力，从而增加其被细胞摄取的效率[18]．在今后的实验中，通过控制SVNs的粒径，并对其表面进行修饰，可增加其被细胞摄取的效率，从而发挥出更强的促细胞成骨分化作用．图3 MG63细胞对SVNs与SV在不同时间点的摄取情况（n=6;*P<0.05;**P<0.01)

图2 HPLC法测定SV的专属性色谱图同时，SVG中的胞内SV含量在达到高峰后随即迅速下降，这种现象在多形核白细胞摄取亚胺培南[19]、人牙周膜成纤维细胞摄取甲硝唑和替硝唑[20]及红细胞摄取抗癌铂的配合物[21]等实验中均有出现．其可能的原因是，SV以被动扩散的方式进入胞内后容易被水解代谢，导致含量下降；也可能是药物与细胞膜相互作用使膜通透性发生改变，导致药物漏出细胞外；此外，细胞膜上的外排蛋白是否也有参与，有待后续实验加以验证．


本文编号：3354853