PXR-MRP2通路在环孢素所致药物性肝损伤中的作用研究
发布时间：2021-08-29 00:34
目的:目前我国的器官移植数量位居世界第二,环孢素（Cyclosporine A,CsA）在器官移植领域中是最常用的免疫抑制剂之一。如何提高患者的生存率和移植物的存活率、减少肝损伤发生率、提高该药临床应用安全性,避免有害的相互作用现今已成为全球研究的热点问题。因此,研究移植手术后CsA致肝损伤的相关危险因素,对临床用药具有重大意义。结合本课题组的前期研究基础,探讨PXR-MRP2通路在环孢素所致药物性肝损伤中的作用机制。本课题利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,构建MRP2基因沉默的细胞株;利用课题组前期建立的CsA致HepG2细胞肝损伤模型,结合构建成功的沉默细胞株,给与不同浓度CsA,考察CsA对HepG2正常细胞、MRP2沉默细胞、PXR沉默细胞三组细胞的相关生化指标及MRP2、PXR蛋白表达和mRNA的影响,在细胞水平探究CsA是否通过PXR信号通路调控MRP2的表达及初步阐明MRP2在CsA致肝损伤中的作用,为临床用药提供理论基础和实验依据。方法:1.以带Puro抗性基因的pHBLV质粒为载体,人工合成MRP2-shRNA序列,pHBLV质粒进行酶...
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pHBLV-MRP2-shRNA质粒测序结果
PXR-MRP2通路在环孢素所致药物性肝损伤中的作用研究33图2-1BSA浓度标准曲线2.4.3Western-blotting检测PXR、MRP2蛋白表达MRP2沉默细胞株的WB结果显示(图2-2):对比MRP2沉默组、Control-MRP2组及HepG2组,MRP2沉默组MRP2基因的蛋白表达显著降低（P<0.05）具有统计学意义，说明RNAi介导的MRP2shRNA序列导入了HepG2细胞株中，成功构建了MRP2沉默细胞株，且MRP2基因的沉默效率约为50%。对比Control-MRP2组和HepG2组，两者的MRP2基因的蛋白表达没有差异，证实导入其他基因序列不会影响目的基因蛋白的表达。PXR沉默细胞株的WB结果显示(图2-2):对比PXR沉默组、Contro-PXR组及HepG2组,PXR沉默组PXR基因的蛋白表达显著降低（P<0.05）具有统计学意义，验证了PXR沉默细胞株仍然有效，且PXR沉默效率约为55%。
湖北中医药大学2020届硕士学位论文34图2-2Westernblot检测PXR,MRP2蛋白表达（sx，n=3）与HepG2组比较，aP<0.05,aaP<0.012.5小结与讨论MRP2，也称为小管多特异性有机阴离子转运蛋白（cMOAT），由ABCC2基因编码，由两个ATP结合结构域和三个跨膜结构域组成。MRP2主要分布于肝细胞毛细胆管膜，在肝脏中表达最高,依靠水解ATP产生的能量,主动向细胞外转运底物[44]，是多种有机阴离子如结合型胆红素、胆汁酸、谷胱甘肽等排泄的主要载体蛋白[45-46]，在肝脏中它有助于消除带正电荷的药物，胆红素，葡糖醛酸苷和结合物进入胆汁，从而降低其底物的生物活性[47]。ABC转运蛋白MRP2可能会影响许多药物和内源性底物的药代动力学特性，导致耐药性的发展，并且可能是药物相互作用的关键部位。PXR在被利福平等PXR配体激活后，通过与基因中的响应元件结合而诱导
【参考文献】：
期刊论文
[1]154例肾病综合征患者环孢素A血药浓度监测及其对疗效、安全性的影响分析[J]. 李瑞莲,陈文倩,张丹,王晓雪,覃旺军,崔刚. 中国药房. 2018(20)
[2]代谢组学在药物性肝损伤研究中的应用[J]. 徐榛,邓中平,孙嘉彬. 中成药. 2019(02)
[3]叙事护理对医院获得性急性肾损伤患者负性情绪和生活质量的影响[J]. 蒋喜平. 中国医学创新. 2018(23)
[4]基因沉默策略及其应用研究进展[J]. 周晓楠,宋雪兰,杨媛,马琛婧,何芳雁. 昆明医科大学学报. 2018(01)
[5]毒理学研究的高内涵筛选及其在药物肝毒性研究中的应用[J]. 葛帅,汤纳平,付立杰,马璟. 中国药理学与毒理学杂志. 2017(06)
[6]HPLC/MS测定环孢素A单用及联用氟康唑的血药浓度[J]. 易林高,吴明钗,黄鹏,陈晓孩,陆日鸣. 中国药物应用与监测. 2016(04)
[7]ABCC2基因单核苷酸多态性对药物临床应用的影响[J]. 魏丹芸,张洪,彭锐,张英. 中国药师. 2015(12)
[8]慢病毒载体的改进为基因治疗带来了新的希望[J]. 方芳,朱平. 中国实验血液学杂志. 2013(05)
[9]ABCC2基因多态性与肾移植受者环孢素所致肝功能异常的相关性研究[J]. 辛华雯,刘慧明,李元启,黄晖,赵丽,余爱荣,李罄,吴笑春,李维亮,熊磊. 中国临床药理学与治疗学. 2013(07)
[10]伏立康唑对家兔体内环孢素A的药动学影响[J]. 邓江红,赵延斌. 中国药师. 2012(12)
硕士论文
[1]黄连素通过PXR信号通路调控CYP3A和P-gp的机制研究[D]. 常伟宇.南方医科大学 2016
本文编号：3369537
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pHBLV-MRP2-shRNA质粒测序结果
PXR-MRP2通路在环孢素所致药物性肝损伤中的作用研究33图2-1BSA浓度标准曲线2.4.3Western-blotting检测PXR、MRP2蛋白表达MRP2沉默细胞株的WB结果显示(图2-2):对比MRP2沉默组、Control-MRP2组及HepG2组,MRP2沉默组MRP2基因的蛋白表达显著降低（P<0.05）具有统计学意义，说明RNAi介导的MRP2shRNA序列导入了HepG2细胞株中，成功构建了MRP2沉默细胞株，且MRP2基因的沉默效率约为50%。对比Control-MRP2组和HepG2组，两者的MRP2基因的蛋白表达没有差异，证实导入其他基因序列不会影响目的基因蛋白的表达。PXR沉默细胞株的WB结果显示(图2-2):对比PXR沉默组、Contro-PXR组及HepG2组,PXR沉默组PXR基因的蛋白表达显著降低（P<0.05）具有统计学意义，验证了PXR沉默细胞株仍然有效，且PXR沉默效率约为55%。
湖北中医药大学2020届硕士学位论文34图2-2Westernblot检测PXR,MRP2蛋白表达（sx，n=3）与HepG2组比较，aP<0.05,aaP<0.012.5小结与讨论MRP2，也称为小管多特异性有机阴离子转运蛋白（cMOAT），由ABCC2基因编码，由两个ATP结合结构域和三个跨膜结构域组成。MRP2主要分布于肝细胞毛细胆管膜，在肝脏中表达最高,依靠水解ATP产生的能量,主动向细胞外转运底物[44]，是多种有机阴离子如结合型胆红素、胆汁酸、谷胱甘肽等排泄的主要载体蛋白[45-46]，在肝脏中它有助于消除带正电荷的药物，胆红素，葡糖醛酸苷和结合物进入胆汁，从而降低其底物的生物活性[47]。ABC转运蛋白MRP2可能会影响许多药物和内源性底物的药代动力学特性，导致耐药性的发展，并且可能是药物相互作用的关键部位。PXR在被利福平等PXR配体激活后，通过与基因中的响应元件结合而诱导
【参考文献】：
期刊论文
[1]154例肾病综合征患者环孢素A血药浓度监测及其对疗效、安全性的影响分析[J]. 李瑞莲,陈文倩,张丹,王晓雪,覃旺军,崔刚. 中国药房. 2018(20)
[2]代谢组学在药物性肝损伤研究中的应用[J]. 徐榛,邓中平,孙嘉彬. 中成药. 2019(02)
[3]叙事护理对医院获得性急性肾损伤患者负性情绪和生活质量的影响[J]. 蒋喜平. 中国医学创新. 2018(23)
[4]基因沉默策略及其应用研究进展[J]. 周晓楠,宋雪兰,杨媛,马琛婧,何芳雁. 昆明医科大学学报. 2018(01)
[5]毒理学研究的高内涵筛选及其在药物肝毒性研究中的应用[J]. 葛帅,汤纳平,付立杰,马璟. 中国药理学与毒理学杂志. 2017(06)
[6]HPLC/MS测定环孢素A单用及联用氟康唑的血药浓度[J]. 易林高,吴明钗,黄鹏,陈晓孩,陆日鸣. 中国药物应用与监测. 2016(04)
[7]ABCC2基因单核苷酸多态性对药物临床应用的影响[J]. 魏丹芸,张洪,彭锐,张英. 中国药师. 2015(12)
[8]慢病毒载体的改进为基因治疗带来了新的希望[J]. 方芳,朱平. 中国实验血液学杂志. 2013(05)
[9]ABCC2基因多态性与肾移植受者环孢素所致肝功能异常的相关性研究[J]. 辛华雯,刘慧明,李元启,黄晖,赵丽,余爱荣,李罄,吴笑春,李维亮,熊磊. 中国临床药理学与治疗学. 2013(07)
[10]伏立康唑对家兔体内环孢素A的药动学影响[J]. 邓江红,赵延斌. 中国药师. 2012(12)
硕士论文
[1]黄连素通过PXR信号通路调控CYP3A和P-gp的机制研究[D]. 常伟宇.南方医科大学 2016
本文编号：3369537
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