泛素—蛋白酶体途径调控铝致tau蛋白异常磷酸化的体外研究

发布时间：2021-09-03 10:15

　　目的:1.阐明泛素-蛋白酶体途径和GSK-3β、PP2A是否参与调控三氯化铝致tau蛋白异常磷酸化。2.研究泛素-蛋白酶体途径调控不同种属来源细胞三氯化铝致tau蛋白异常磷酸化是否存在位点差异。方法:1.选择鼠源性N2a细胞株和人源性SH-SY5Y细胞株作为实验材料,用三氯化铝进行染毒处理,铝离子浓度分别为0.5、1和2mmol/L,作为低剂量组、中剂量组、高剂量组,对照组不做任何处理。在细胞生长对数期进行染毒,染毒24h后光学显微镜下观察细胞形态,并利用cck-8检测细胞活力,收集细胞样品,提取细胞总蛋白,用蛋白免疫印迹法分别测定N2a和SH-SY5Y细胞的tau-5、pThr181、pThr231、pSer262、pSer396蛋白以及Hsp70和CHIP蛋白的表达量;ELISA法分别检测N2a和SH-SY5Y细胞泛素（Ub）、GSK-3β和PP2A的表达量。2.采用蛋白酶体抑制剂MG132处理N2a细胞和SH-SY5Y细胞6h,三氯化铝染毒,实验分组为对照组、5μmol/L MG132组、1mmol/LAl³⁺组、5μmol/L MG132+1mmol/LA... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度三氯化铝处理N2a细胞形态学变化（×200）

高剂量组 87.70±0.10*注：与对照组相比，**P﹤0.05。如图2所示，光学显微镜下观察不同染铝剂量组SH-SY5Y细胞形态发现，对照组细胞状态良好，大小均一，密集铺满培养瓶底（图 2A）；低剂量组与对照组相比，细胞数量减少，突触变短，细胞间连接减少（图 2B）；中剂量组细胞数量明显减少，突触进一步变短，部分细胞变圆（图 2C）；高剂量组细胞数量明显少于前三组，且细胞变圆，突触几乎消失（图 2D）。A BC D

13图 3 不同浓度三氯化铝处理 N2a 细胞 24h 后，细胞总 tau 蛋白及磷酸化 tau 蛋白表达的变化情况。随着染铝浓度的升高，总 tau 蛋白表达量增加（A），pThr231（C）、pSer262（D）、pSer396（E）位点的磷酸化程度升高，但 pThr181（B）位点的磷酸化程度随染铝浓度升高变化不明显。统计分析结果以内参蛋白 GADPH 标准化后表示。与对照组相比，#P＜0.01。

【参考文献】：
期刊论文
[1]铜、铁、锌、铝通过Akt/GSK-3β信号通路诱导SH-SY5Y细胞的凋亡[J]. 朱敬丽,路赵硕,吴越,徐彦吉,姚建,王鑫鑫,王德才.  实用老年医学. 2017(08)
[2]Impact of Sub-chronic Aluminium-maltolate Exposure on Catabolism of Amyloid Precursor Protein in Rats[J]. LIANG Rui Feng,LI Wei Qing,WANG Hong,WANG Jun Xia,NIU Qiao.  Biomedical and Environmental Sciences. 2013(06)
[3]慢性铝暴露对小鼠学习记忆及tau蛋白磷酸化的影响[J]. 贾志建,路小婷,潘宝龙,王昊,刘莹,牛侨.  环境与职业医学. 2012(04)
[4]氯化锂抑制β-淀粉样蛋白诱导细胞Tau蛋白磷酸化[J]. 孙治坤,杨红旗,陆国强,丁健青,陈生弟.  中国药理学通报. 2008(01)
[5]三氯化铝对SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化作用[J]. 王昊,路小婷,贾志健,牛侨.  中华劳动卫生职业病杂志. 2013 (02)

硕士论文
[1]职业铝接触对作业工人tau蛋白磷酸化的影响及作用[D]. 李瑞.山西医科大学 2016
[2]断乳大鼠亚慢性染铝对脑脂质过氧化和海马细胞凋亡影响的实验研究[D]. 王军明.中国医科大学 2005



本文编号：3380927