CCL17在DC交叉呈递长表位肽活化CTL抗肿瘤中的作用

发布时间：2021-09-03 20:20

　　目的:通过研究趋化因子CCL17对DC细胞交叉提呈抗原长肽诱导细胞毒性T淋巴细胞的影响,增加对交叉提呈分子机制的认识,为肿瘤免疫治疗提供新的思路和方法。方法:体外诱导人源树突状DC细胞,观察DC细胞形态学特征及细胞表面标记分子表达情况;免疫染色法和流式检测未成熟DC细胞对长肽抗原的吞噬能力。将未成熟DC细胞与T淋巴细胞共培养诱导CTL细胞,然后利用ELISA检测体外诱导的CTL细胞对IFN-γ的分泌能力,在交叉呈递过程中加入蛋白酶体抑制剂LLnL,检测CTL细胞的IFN-γ分泌情况。钙黄绿素法检测体外诱导的CTL细胞对负肽的T2细胞及肝癌细胞的细胞毒作用。RT-PCR和ELISA检测趋化因子CCL17在DC细胞中的表达特性以及交叉呈递过程中趋化因子CCL17的含量。通过趋化因子CCL17中和抗体或利用CRISPR-Cas9技术敲除未成熟DC细胞中CCL17基因,检测未成熟DC细胞的吞噬能力,然后检测未成熟DC细胞对CTL细胞的活化能力及未成熟DC细胞交叉激活的CTL细胞对负肽的T2细胞的杀伤能力。然后通过外源加入重组CCL17蛋白,检测诱导的CTL细胞的杀伤能力。再通过流式细胞术检测加... 

【文章来源】：广东药科大学广东省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DC细胞对Sur79L2长肽的交叉提呈Fig.1-1Cross-PresentationoflongpeptideSur79L2byDCcells

图 2-2 DC 细胞的表面分子表达情况检测Fig.2-2 Detection of surface molecμ lar expression of DC cellsNote: (a) The expression of CD1a molecules on the surface of immature DC cells. (b) Theexpression of CD1a molecμ les on the surface of mature DC cells. (c) The expression of CD86molecules on the surface of immature DC cells. (b) The expression of CD86 molecules on thesurface of mature DC cells.2.3.3 荧光检测未成熟 DC 细胞对长肽抗原的吞噬作用DiI 是一种亲脂性荧光染料，进入 DC 细胞膜后，在整个膜上扩散，在其进入细胞膜之前荧光非常弱，且当与细胞膜结合后荧光强度大大增强，通常不会影响细胞的生存力和吞噬能力，于荧光显微镜下被激发后，在 564nm(TRITC)的吸光

图 2-3 倒置荧光显微镜检测 DC 细胞吞噬作用Fig.2-3 Detection of phagocytosis of DC cells by inverted fluorescence microscopyNote:(a) DC cells under white light. (b) DC cells under 564nm. (c) DC cells under 488nm.2.3.4 流式检测未成熟 DC 细胞对长肽抗原的吞噬作用通过对细胞进行DiI膜染色，再与FITC标记的Sur79L2长肽抗原共孵育30min后，经流式细胞仪检测分析，如图 2-4 所示，与对照组细胞相比，加入 Sur79L2长肽抗原后的 DC 细胞 FITC 阳性率达到 70%以上，说明实验组未成熟 DC 细胞对长肽抗原具有良好的吞噬能力。

【参考文献】：
期刊论文
[1]稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系的建立及CCL17活化T淋巴细胞功能的初步鉴定[J]. 沈晗,聂建云,邵红伟,黄树林.  广东医学. 2012(21)



本文编号：3381796