LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中可乐定的浓度

发布时间：2021-09-11 22:07

　　目的建立一种LC-MS/MS法,测定Beagle犬血浆中可乐定的质量浓度,从而对盐酸可乐定缓释片在犬体内的药物动力学行为进行研究。方法采用液-液萃取法制备血浆样品;色谱柱:Luna C₁₈柱,采用梯度洗脱方式,流动相:A为甲醇（含体积分数为0.3%的甲酸溶液）,B为5 mmol·L^-1醋酸铵缓冲溶液（含体积分数为0.3%的甲酸溶液）;采用多反应监测扫描方式,测定Beagle犬口服给予盐酸可乐定缓释片后血浆中可乐定的质量浓度。结果 Beagle犬血浆中可乐定的质量浓度在25¹ 000 ng·L^-1内线性关系良好,相关系数r=0.998 6;日内和日间精密度不大于13.2%;犬血浆样品中可乐定的提取回收率在76.0%⁸2.3%内,基质效应在100.3%¹12.0%内。结论该方法适合于犬体内可乐定的药物动力学的研究。 

【文章来源】：沈阳药科大学学报. 2017,34(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

可乐定的化学结构式

质??%，流速:0.2mL·min－1，进样量:10μL。质谱条件:离子源为TIS源，源电压:4000V，雾化气:N2(275.8kPa)，辅助加热气:N2(275.8kPa)，气帘气:N2(206.9kPa)，碰撞气:N2(69.0kPa)，雾化温度:550℃，扫描方式:多反应监测(multiplereactionmonitoring，MＲM)，检测方式:正离子检测，检测离子:m/z230.1→m/z44.1(可乐定)、m/z233.2→m/z174.2(美乐托宁，内标)，可乐定及美乐托宁的二级全扫描质谱图见2A和2B。Fig．2Fullscanproduction［M+H］+massspectraofclonidine(A)andmelatonin(B，IS)图2可乐定(A)和内标美乐托宁(B)［M+H］+的产物离子全扫描质谱图2.2溶液的制备2.2.1标准溶液与质量控制溶液精密称取盐酸可乐定对照品11.6mg(相当于可乐定10.0mg)于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并摇匀，制成质量浓度为1.00g·L－1的储备液，再用甲醇将储备液逐级稀释至质量浓度分别为1.25、2.50、6.25、12.5、25.0、50.0μg·L－1的系列标准溶液。另精密称取盐酸可乐定标准品11.6mg(相当于可乐定10.0mg)于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并摇匀，制成质量浓度为1.00g·L－1的储备液，再用甲醇将储备液逐级稀释至质量浓度分别为1.25、3.00、10.0、40.0μg·L－1的质量控制(qualitycontrol，QC)溶液。2.2.2内标溶液精密称取美乐托宁原料药10.0mg于10mL量瓶中，加入甲醇，溶解、定容并摇匀，制成质量浓度为1.00g·L－1的储备液I。精密吸取储备液I0.1mL至20mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，得5.00mg·L－1的储备液II。精密吸取储备液II0.1mL至20mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，得25.0μg·L－1的美乐托宁内标溶液。2.2.3醋酸铵溶液称取醋酸铵3.08g，加水400mL溶解，制成?

1mol·L－1碳酸钠溶液100μL、乙酸乙酯2mL，涡旋1min，振摇10min，离心(4000r·min－1)10min，取上清液于40℃空气流下吹干，残渣溶于100μL甲醇－5mmol·L－1醋酸铵缓冲溶液(体积比为5∶95)，涡旋1min，取10μL上清液进行LC-MS/MS分析。2.4方法学的确证2.4.1方法的选择性取6种空白Beagle犬血浆，各500μL，加入到不同的10mL玻璃管中，除以10μL甲醇代替内标溶液外，其余按“2.3”条操作，分析获得的色谱图见图3A。取空白Beagle犬血浆500μL，加入到10mL玻璃管中，除以10μL一定浓度的标准溶液代替甲醇外，其余按“2.3”条操作，分析获得的色谱图见图3B;其中可乐定的保留时间约为2.67min，内标美乐托宁的保留时间约为3.51min。采集给药后的Beagle犬血浆，按“2.3”条操作，分析获得的色谱图见图3C。结果显示，犬血浆基质对待测物可乐定及内标美乐托宁的测定无明显干扰。A—Blankplasmasample;B—Blankplasmaspikedwithclonidine(25.0ng·L－1)andmelatonin(0.5μg·L－1);C—ABeagledogplasmasamplecollected4hafteroraladministrationofreferenceproductFig．3ＲepresentativeMＲMspectraofclonidine(I)andmelatonin(II，IS)inplasmasamples图3血浆中可乐定(I)和内标美乐托宁(II)的典型MＲM色谱图2.4.2标准曲线取可乐定系列标准溶液(1.25、2.50、6.25、12.5、25.0、50.0μg·L－1)各10μL，置于10mL玻璃管中，加入空白犬血浆500μL，制备相当于质量浓度为25.0、50.0、125、250、500和1000ng·L－1的血浆样品，并依次加入内标溶液10μL，其余按“2.3”条操作。每一浓度均进行双样本分析，得到色谱图，以可乐定的质量浓度为横坐标，可乐定与美乐托宁的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法进?

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3393803