DAIa2GIP抑制软骨细胞线粒体凋亡的机制研究
发布时间：2021-09-30 06:18
目的:1.观察DAIa2GIP拮抗IL-1β诱发软骨细胞线粒体凋亡的效应;2.探讨DAIa2GIP拮抗软骨细胞损伤的分子机制;3.为骨关节炎药物治疗提供新的思路,寻找新的突破,同时为骨关节炎的转化医学研究提供实验依据。方法:本实验选取SD大鼠出生7日幼鼠的肋软骨细胞,仔细分离消化后用含1%双抗、10%胎牛血清的DMEM培养基进行培养,制作细胞爬片利用免疫组化法进行细胞鉴定,选取培养的第三代细胞进行实验。将细胞在上述培养基基础上不同处理后分为6组,具体为:（1）正常对照组:原培养基基础上不添加其他药物;（2）IL-1β诱导组:加入IL-1β（10 ng/m L）;（3）IL-1β+DAla2GIP孵育组:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）;（4）IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP（GIPR拮抗剂）孵育组:加入IL-1β（10 ng/m L）、DAla2GIP（100p M）、pro3 GIP（100p M）;（5）DAla2GIP孵育组:加入DAla2GIP（100p M）;（6）pro3GIP孵育组:加入pro3GIP（100p M）。在相...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫组织化学染色荧光显微镜鉴定软骨细胞ACollagenⅡ荧光染色图片，放大倍数100X；
山西医科大学（博）硕士学位论文9软骨细胞凋亡率：IL-1β+DAla2GIP孵育组（1.05%±0.05%）明显低于IL-1β诱导组（3.85%±0.55%）（P<0.01）；IL-1β诱导组与IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP孵育组（3.25%±0.25%）无明显统计学差异（P>0.05），且两组均高于正常对照组（0.95%±0.15%）（P<0.01）；正常对照组、DAla2GIP孵育组（1.7%±0.4%）及pro3GIP孵育组（1.1%±0.4%）均无明显统计学差异（P>0.05）。图2：A，各组细胞流式细胞学结果，横坐标表示Annexin-VFITC染色凋亡细胞百分比，纵坐标表示线粒体膜电位测试活细胞膜电位保持度；；B图和C图分别是线粒体膜电位及Annexin-VFITC检测的统计直方图，**P<0.01vsControl组，##P<0.01vsIL-1β组，△△P<0.01vsIL-1β+DAla2GIP组。2.2.1荧光显微镜如图3为各处理组细胞英冠显微镜下观察。Mito-TrackerRedCMXRos染液为红色荧光，标记保持线粒体膜电位的活细胞，且随着线粒体膜电位的减弱到丧失红色荧
2.5.2 测 Bcl-2 含量结果（以相对灰度值进行比较）如图 5 所示 IL-1β+DAla2GIP 孵育组（109.87%±14.64）较 IL-1β诱导组（60.18%±6.74%），明显增高（P<0.01）；IL-1β诱导组与 IL-1β+DAla2GIP+ pro3GIP 孵育组（60.88%±8.80）无明显差异（P>0.05），且两组相比较均低于正常对照组（100%±9.09%）（P<0.01）；正常对照组、DAla2GIP 孵育组（96.32%±8.35%）及 pro3GIP孵育组(97.82%±7.57%)三组之间均无明显差异（P>0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Kinsenoside attenuates osteoarthritis by repolarizing macrophages through inactivating NF-κB/MAPK signaling and protecting chondrocytes[J]. Feng Zhou,Jingtian Mei,Xiuguo Han,Hanjun Li,Shengbing Yang,Minqi Wang,Linyang Chu,Han Qiao,Tingting Tang. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
[2]p53-Bcl-2/Bax凋亡信号通路变化在自发性高血压大鼠左心室重构进程中作用（英文）[J]. 孙瑞敏,俞雪,付舒,吴雨婷,岳云,李叶丽,杨丹莉. 遵义医学院学报. 2019(02)
[3]中国膝关节骨关节炎流行病学调查现状[J]. 辛丽维. 双足与保健. 2018(20)
[4]Notch信号通路在膝骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用研究[J]. 吴绍军,刘俊才,左银龙,李忠. 华西医学. 2018(09)
[5]骨关节炎与MAPK信号通路关系的研究概况[J]. 王涛,殷红,廖江龙,何云鹏,李金磊,艾元亮,许燕飞,刘维统,杨光,温辉,杨景帆. 中国民族民间医药. 2017(19)
[6]基于肠促胰素治疗对骨代谢的影响[J]. 项守奎,华飞,章振林. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2017(04)
[7]糖尿病与骨关节炎相关性的Meta分析[J]. 王华军,陈均源,罗斯敏,桂涛,桑园,吴文锐,刘宁,查振刚. 中国矫形外科杂志. 2017(11)
[8]肠促胰素与骨代谢[J]. 余洁,许岭翎. 中华糖尿病杂志. 2017 (03)
[9]p38 MAPK信号转导通路在骨关节炎中的相关研究[J]. 林学义,苏友新. 福建中医药. 2013(01)
[10]TGF-β超家族在软骨发生、发育和维持中的作用[J]. 杨冠,杨晓. 遗传. 2008(08)
本文编号：3415278
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
免疫组织化学染色荧光显微镜鉴定软骨细胞ACollagenⅡ荧光染色图片，放大倍数100X；
山西医科大学（博）硕士学位论文9软骨细胞凋亡率：IL-1β+DAla2GIP孵育组（1.05%±0.05%）明显低于IL-1β诱导组（3.85%±0.55%）（P<0.01）；IL-1β诱导组与IL-1β+DAla2GIP+pro3GIP孵育组（3.25%±0.25%）无明显统计学差异（P>0.05），且两组均高于正常对照组（0.95%±0.15%）（P<0.01）；正常对照组、DAla2GIP孵育组（1.7%±0.4%）及pro3GIP孵育组（1.1%±0.4%）均无明显统计学差异（P>0.05）。图2：A，各组细胞流式细胞学结果，横坐标表示Annexin-VFITC染色凋亡细胞百分比，纵坐标表示线粒体膜电位测试活细胞膜电位保持度；；B图和C图分别是线粒体膜电位及Annexin-VFITC检测的统计直方图，**P<0.01vsControl组，##P<0.01vsIL-1β组，△△P<0.01vsIL-1β+DAla2GIP组。2.2.1荧光显微镜如图3为各处理组细胞英冠显微镜下观察。Mito-TrackerRedCMXRos染液为红色荧光，标记保持线粒体膜电位的活细胞，且随着线粒体膜电位的减弱到丧失红色荧
2.5.2 测 Bcl-2 含量结果（以相对灰度值进行比较）如图 5 所示 IL-1β+DAla2GIP 孵育组（109.87%±14.64）较 IL-1β诱导组（60.18%±6.74%），明显增高（P<0.01）；IL-1β诱导组与 IL-1β+DAla2GIP+ pro3GIP 孵育组（60.88%±8.80）无明显差异（P>0.05），且两组相比较均低于正常对照组（100%±9.09%）（P<0.01）；正常对照组、DAla2GIP 孵育组（96.32%±8.35%）及 pro3GIP孵育组(97.82%±7.57%)三组之间均无明显差异（P>0.05）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Kinsenoside attenuates osteoarthritis by repolarizing macrophages through inactivating NF-κB/MAPK signaling and protecting chondrocytes[J]. Feng Zhou,Jingtian Mei,Xiuguo Han,Hanjun Li,Shengbing Yang,Minqi Wang,Linyang Chu,Han Qiao,Tingting Tang. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2019(05)
[2]p53-Bcl-2/Bax凋亡信号通路变化在自发性高血压大鼠左心室重构进程中作用（英文）[J]. 孙瑞敏,俞雪,付舒,吴雨婷,岳云,李叶丽,杨丹莉. 遵义医学院学报. 2019(02)
[3]中国膝关节骨关节炎流行病学调查现状[J]. 辛丽维. 双足与保健. 2018(20)
[4]Notch信号通路在膝骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用研究[J]. 吴绍军,刘俊才,左银龙,李忠. 华西医学. 2018(09)
[5]骨关节炎与MAPK信号通路关系的研究概况[J]. 王涛,殷红,廖江龙,何云鹏,李金磊,艾元亮,许燕飞,刘维统,杨光,温辉,杨景帆. 中国民族民间医药. 2017(19)
[6]基于肠促胰素治疗对骨代谢的影响[J]. 项守奎,华飞,章振林. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2017(04)
[7]糖尿病与骨关节炎相关性的Meta分析[J]. 王华军,陈均源,罗斯敏,桂涛,桑园,吴文锐,刘宁,查振刚. 中国矫形外科杂志. 2017(11)
[8]肠促胰素与骨代谢[J]. 余洁,许岭翎. 中华糖尿病杂志. 2017 (03)
[9]p38 MAPK信号转导通路在骨关节炎中的相关研究[J]. 林学义,苏友新. 福建中医药. 2013(01)
[10]TGF-β超家族在软骨发生、发育和维持中的作用[J]. 杨冠,杨晓. 遗传. 2008(08)
本文编号：3415278
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