羊毛固醇合成酶抑制剂对皮肤角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响

发布时间：2021-10-09 22:25

　　目的:羊毛固醇合成酶抑制剂（RO 48–8071,RO）处理皮肤角质形成细胞（KCs）,探讨RO对皮肤角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响,并初步探讨可能的分子机制,为阐明甲羟戊酸途径在皮肤生长发育及皮肤疾病中的作用奠定基础。方法:（1）取外科手术正常皮肤组织,培养人的原代皮肤角质形成细胞（KCs）;（2）以不同浓度的RO（0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0μM）处理KCs 72 h,筛选有效RO浓度。（3）RO调控KCs增殖分析:以有效浓度的RO（10.0μM）或联合下游产物胆固醇（CH,40μM）作用于KCs（24h,48h和72h）,MTS法分析上述处理对细胞增殖的影响,流式细胞术分析其对KCs细胞周期的影响;提取细胞总蛋白,Western Blot法分析细胞周期相关蛋白CyclinB1及CyclinE表达变化。（4）RO对Ca²⁺诱导的KCs分化标志蛋白表达的影响:RO（10.0μM）单独或联合CH（40μM）作用于KCs 24h,48h和72h后,加入Ca²⁺（1.8mM）处理24 h,Western ... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度羊毛固醇合成酶抑制剂RO对KCs细胞增殖的影响（*p<0.05）

用 RO（10μM）单独或联合 CH（40μM）处理 KCs 24h，48h 和 72h 后，对皮肤角质形成细胞的增殖抑制率分别约为 10%、40% 和 65%，与对照组相比RO显著抑制KCs的增殖（p<0.05），表现出时间依赖效应（图2）。3.2.3 CH 部分补救 RO 对 KCs 的增殖抑制作用LSS 是胆固醇合成途径下游的重要的关键酶，因此当 RO 抑制该酶活性后，导致下游产物不足，尤其是终产物 CH，而 CH 是细胞的基本组成成分之一，也参与许多细胞生理功能。为了探讨 RO 抑制 KCs 增殖是否与 CH 的缺乏有关，与RO 联合使用 40μM CH共同处理 KCs，从图2中可以看到

期细胞比例与 RO 单独处理72h（83.16%）相比显著性下降，而 S 期细胞比例显著上升（9.11%）。图3 单独使用抑制剂 RO 和使用抑制剂 RO 并添加下游产物胆固醇（CH）对 KCs细胞周期的影响（* p <0.05）Figure 3 The effect of RO alone and RO combined with downstream cholesterol (CH)on the cell cycle of KCs (*p <0.05)


本文编号：3427110