可注射aFGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶的制备及药效学研究

发布时间：2021-11-07 16:48

　　目的:研究制备可注射a FGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶并进行评价,建立其质量标准体系,并通过体外PC12神经细胞缺氧损伤模型及大鼠坐骨神经损伤模型研究其对神经损伤的修复作用,同时通过急性毒性试验,生物相容性试验进行了初步安全性评价,为可注射a FGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶的应用提供依据。方法:（1）以氯磺酸为磺化试剂进行壳寡糖的定点修饰;（2）采用泊洛沙姆为温敏基质制备a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶。扫描电镜观察其内部围观结构;（3）双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定a FGF的含量,3T3细胞MTT法测定凝胶内a FGF活性;（4）利用连二硫酸钠（Na2S2O4）对PC12细胞进行缺氧损伤,建立细胞损伤模型,研究a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶的神经保护作用;（5）建立坐骨神经损伤大鼠模型,测定机械缩足阈值和热缩足潜伏期研究其对切断的大鼠坐骨神经的修复作用;（6）通过小鼠急性毒性试验、血液相容性试验和小鼠皮下注射的组织相容性试验进行a FGF磺化壳寡糖温敏水凝胶的初步安全性评价。结果:（1）得到磺化壳寡糖,以红外光谱、元素分析、核磁共振等方法对磺化壳寡糖的结构进行分析验证;（2）... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语
第一章 前言
    1.1 周围神经损伤修复的研究概况
    1.2 成纤维细胞生长因子的研究概况
    1.3 新型智能生物材料的研究现状
    1.4 本研究的立题依据及研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容及技术路线
第二章 壳寡糖的磺化修饰
    2.1 实验仪器与材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 磺化壳寡糖的制备
        2.2.2 磺化壳寡糖理化性质的检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 磺化壳寡糖理化性质的检测
    2.4 小结与讨论
第三章 aFGF磺化壳寡糖温敏凝胶的制备
    3.1 实验仪器与材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验材料
    3.2 实验部分
        3.2.1 aFGF磺化壳聚糖温度敏感凝胶的制备
        3.2.2 不同比例的泊洛沙姆对水凝胶胶凝温度的影响
        3.2.3 aFGF磺化壳聚糖温敏凝胶评价
    3.3 实验结果
        3.3.1 凝胶性状的鉴别
        3.3.2 不同比例的泊洛沙姆对水凝胶胶凝温度的影响
        3.3.3 温敏凝胶扫描电镜图谱
        3.3.4 温敏凝胶溶蚀度与aFGF在温敏凝胶中的释放行为的考察
    3.4 小结与讨论
第四章 aFGF磺化壳寡糖温敏凝胶的质量控制
    4.1 实验仪器与材料
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 aFGF磺化壳寡糖温敏凝胶的制备
        4.2.2 aFGF的鉴别
        4.2.3 aFGF含量方法
        4.2.4 aFGF/磺化壳寡糖温敏型凝胶剂中aFGF活性的测定
        4.2.5 aFGF/磺化壳寡糖温敏型凝胶剂稳定性实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 aFGF的鉴别
        4.3.2 标准曲线的建立
        4.3.3 方法精密度的考察
        4.3.4 加样回收率
        4.3.5 样品中aFGF含量测定
        4.3.6 aFGF/磺化壳寡糖温敏型凝胶剂中aFGF活性的测定
        4.3.7 aFGF/磺化壳寡糖温敏型凝胶剂稳定性实验结果
    4.4 小结与讨论
第五章 aFGF磺化壳寡糖温敏水凝胶对PC12细胞氧化损伤模型的保护作用研究
    5.1 实验仪器与材料
        5.1.1 实验仪器
        5.1.2 实验材料
    5.2 实验方法
        5.2.1 MTT法检测Na_2S_2O_4对PC12细胞存活率的影响
        5.2.2 检测不同浓度Na_2S_2O_4对PC12细胞中LDH释放量的影响
        5.2.3 不同浓度的aFGF溶液对氧化损伤PC12细胞的LDH的释放的影响
        5.2.4 不同浓度的磺化壳寡糖对PC12细胞存活率的影响
        5.2.5 不同浓度的磺化壳寡糖对氧化损伤PC12细胞的LDH的释放的影响
        5.2.6 aFGF联合不同浓度的磺化壳寡糖对氧化损伤PC12细胞的LDH的释放的影响
    5.3 实验结果
        5.3.1 MTT法检测不同浓度Na_2S_2O_4对PC12细胞存活率的影响
        5.3.2 不同浓度的Na_2S_2O_4对PC12细胞LDH释放量的影响
        5.3.3 不同浓度的aFGF对缺氧损伤PC12细胞LDH释放量的影响
        5.3.4 单独使用磺化壳寡糖对PC12细胞存活率的影响
        5.3.5 不同浓度的磺化壳寡糖对Na_2S_2O_4氧化损伤PC12细胞的LDH的释放的影响
        5.3.6 aFGF联合不同比例的磺化壳寡糖对氧化损伤PC12细胞的LDH的释放的影响
    5.4 小结与讨论
第六章 aFGF磺化壳寡糖温敏水凝胶对坐骨神经损伤大鼠模型的治疗作用研究
    6.1 实验仪器与实验材料
        6.1.1 实验仪器
        6.1.2 实验动物
    6.2 实验方法
        6.2.1 坐骨神经损伤修复实验
    6.3 实验结果
        6.3.1 aFGF温敏凝胶剂对坐骨神经损伤的修复实验
        6.3.2 坐骨神经愈合程度的观察
    6.4 小结与讨论
第七章 aFGF磺化壳寡糖温敏水凝胶初步安全性评价
    7.1 实验仪器与材料
        7.1.1 实验仪器
    7.2 实验方法
        7.2.1 急性毒性试验方法
        7.2.2 生物相容性试验
        7.2.3 溶血率试验
    7.3 实验结果
        7.3.1 aFGF温敏凝胶剂的急性毒性试验
        7.3.2 生物相容性试验
        7.3.3 溶血率试验
    7.4 小结与讨论
第八章 结论与展望
    8.1 全文总结
    8.2 展望
参考文献
附录
个人简历、参研项目及论文发表情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]多糖及多糖衍生物/泊洛沙姆温敏水凝胶的制备及其性能研究[J]. 胡亦清,赖欣宜,罗嘉浩,龙茜,曾春莲,傅超萍,冯子乐,曲海洪,章戴荣,康贤通,张黎明,杨立群.  中山大学学报(自然科学版). 2015(06)
[2]Repairing peripheral nerve injury using tissue engineering techniques[J]. Ernest W.Wang,Jun Zhang,Jason H.Huang.  Neural Regeneration Research. 2015(09)
[3]血管内皮生长因子联合碱性成纤维细胞生长因子对大鼠后肢动脉硬化闭塞血管再生机制的研究[J]. 杨婷,王凯峰,孙瑶,刘彦辉,王瀚锐,范东旭,金松,窦鹏挥,刘彦东.  中国普外基础与临床杂志. 2015(08)
[4]自体神经外膜小间隙吻合修复周围神经断裂的临床研究[J]. 罗飞.  中国现代药物应用. 2015(16)
[5]新型壳聚糖基温敏凝胶膜引导骨再生性能的体外实验研究[J]. 梁杰,崔军,许胜,周倜,徐伟成,徐欣.  上海口腔医学. 2015(04)
[6]壳寡糖及其衍生物的抗氧化活性[J]. 钟佳,刘进辉,肖定福,李文平.  动物医学进展. 2015(07)
[7]合成可生物降解神经导管修复损伤周围神经:生物相容性良好[J]. 张孙富,王斌.  中国组织工程研究. 2015(25)
[8]碱性成纤维细胞生长因子促进神经损伤修复的研究进展[J]. 张超,项丽娜,陈德培,吕鑫鑫,赵宜桐,王璐瑶,肖健,张宏宇.  中国生物工程杂志. 2015(06)
[9]组织工程材料在周围神经损伤修复中应用的研究进展[J]. 陶学强,祁全.  中国矫形外科杂志. 2015(04)
[10]颏神经、颊神经及鼻腭神经损伤的原因及防治[J]. 邓天阁,周宏志,胡开进,秦瑞峰.  中国实用口腔科杂志. 2014(09)

博士论文
[1]肝素化壳聚糖/大豆蛋白质复合材料的制备及其抗凝血功能研究[D]. 王小梅.武汉大学 2011

硕士论文
[1]CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究[D]. 黄振.苏州大学 2015
[2]腺病毒介导的BDNF基因对脊髓中BDNF基因表达的影响[D]. 郭尔斐.河北医科大学 2009
[3]改构体aFGF对帕金森病大鼠神经元损伤的保护[D]. 肖春苟.暨南大学 2005
[4]生物酶降解壳聚糖及其应用研究[D]. 王奎兰.广东工业大学 2004



本文编号：3482206