壳寡糖联合阿霉素对MDA-MB-231细胞的抑制作用与机制研究

发布时间：2021-11-10 19:10

　　三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是一类侵袭性强、预后差的恶性肿瘤。然而,由于其对分子靶向治疗和内分泌治疗不敏感,以蒽环类药物为主的化疗仍然是TNBC的主要治疗方法。为了减轻化疗毒副作用对机体的损伤,膳食补充被建议使用作为新的辅助化疗方案,其潜在的分子机制尚未完全阐明。因此,寻求安全有效、易于获得、副作用小的辅助化疗药物是三阴性乳腺癌的治疗趋势。壳寡糖（chitosan oligosaccharides,COS）是一种膳食补充剂,已被大量实验证实能有效抑制肿瘤细胞的增殖。但现有体外实验研究普遍采用的较高剂量,未能充分认识COS的抗肿瘤作用。因此,有必要探究低浓度COS及其与化疗药阿霉素（doxorubicin,DOX）的联合给药对三阴性乳腺癌细胞模型的干预,以及是否对阿霉素的抑癌效果产生影响。实验在高转移特性的三阴性乳腺癌典型细胞株MDA-MB-231上评价了COS与阿霉素联用的抗肿瘤活性,进而采用转录组学测序技术（RNA-seq）挖掘分析其潜在分子靶点。主要研究工作及结果如下:（1）COS组分表征。采用液相色谱-质谱联用法对本实验采用... 

【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 三阴性乳腺癌(TNBC)概述
        1.1.1 TNBC简介
        1.1.2 TNBC特性与复杂性
        1.1.3 TNBC治疗方法与趋势
    1.2 壳寡糖(COS)概述
        1.2.1 COS概况
        1.2.2 COS抗肿瘤特性
        1.2.3 COS与膳食治疗
    1.3 转录组测序技术(RNA-seq)概述
        1.3.1 RNA-seq简介
        1.3.2 测序技术发展史与比较
        1.3.3 RNA-seq的应用
    1.4 立题依据及研究内容
        1.4.1 立题依据
        1.4.2 研究内容
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料与试剂
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验细胞系
    2.3 实验仪器
    2.4 实验方法
        2.4.1 试剂配制
        2.4.2 液相色谱-质谱联用法(LC-MS)检测
        2.4.3 细胞培养
        2.4.4 细胞生存率检测
        2.4.5 细胞形态学检测
        2.4.6 Transwell法检测细胞迁移
        2.4.7 激光共聚焦检测阿霉素入核荧光强度
        2.4.8 流式细胞术检测阿霉素入核荧光强度
        2.4.9 RNA-seq分析方案
        2.4.10 mRNA文库构建及测序流程
        2.4.11 RNA-seq分析
        2.4.12 TRIzol法总RNA提取
        2.4.13 q RT-PCR法检测差异基因m RNA表达
        2.4.14 小干扰RNA(si RNA)法沉默差异基因表达
        2.4.15 免疫印迹法(Western blot)检测关键基因蛋白表达
    2.5 统计学分析
第三章 结果与讨论
    3.1 COS组成成分分析
    3.2 COS单独给药对细胞生存率影响
    3.3 COS与阿霉素联合给药对细胞生存率影响
        3.3.1 阿霉素的半数抑制浓度(IC50)测定
        3.3.2 COS预孵时间优化
        3.3.3 COS浓度优化
        3.3.4 COS聚合度优化
    3.4 COS联合阿霉素抑制MDA-MB-231 细胞的机制分析
        3.4.1 COS单独作用对细胞迁移能力的影响
        3.4.2 COS预孵对细胞形态学的影响
        3.4.3 COS预孵对阿霉素入核的影响
    3.5 转录组学分析结果
        3.5.1 基础分析
        3.5.2 基因表达量分布
        3.5.3 主成分(PCA)分析
        3.5.4 基因表达韦恩(Venn)分析
        3.5.5 壳三糖预孵的时间序列分析
        3.5.6 壳三糖预孵调控的差异基因分析
        3.5.7 壳三糖在联合给药中调控的差异基因分析
    3.6 差异基因验证
        3.6.1 壳三糖预孵作用差异基因验证
        3.6.2 壳三糖在联合给药中调控靶基因功能验证
结论与展望
致谢
参考文献
附录 :作者在攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]PD-1/PD-L1在治疗三阴性乳腺癌中的研究进展[J]. 林炳静,徐寒梅,孙晴波,胡加亮.  药物生物技术. 2019(01)
[2]中国女性三阴性乳腺癌发病相关因素的Meta分析[J]. 余艳琴,贾萌萌,郝金奇,富诗岚,徐慧芳,赵方辉,胡尚英,范金虎,乔友林.  中国肿瘤. 2018(11)
[3]三阴性乳腺癌影像学研究进展[J]. 翟春丽,郑建军,彭卫军.  现代实用医学. 2018(05)
[4]三阴性乳腺癌雄激素受体靶向治疗的研究进展[J]. 陈俊青,陈占红,王晓稼.  肿瘤学杂志. 2018(05)
[5]三阴性乳腺癌的影像学诊断研究进展[J]. 周航,周显礼.  肿瘤影像学. 2018(01)
[6]RNA-seq及其应用[J]. 高志勇,谢恒星,李吉锋,刘史力.  生命的化学. 2018(01)
[7]中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2017年版）[J]. 中国抗癌协会乳腺癌专业委员会.  中国癌症杂志. 2017(09)
[8]三阴性乳腺癌精准治疗的机遇[J]. 叶青,江泽飞.  中国肿瘤临床. 2016(24)
[9]Chitooligosaccharides promote radiosensitivity in colon cancer line SW480[J]. Fu-Shi Han,Shi-Jie Yang,Mou-Bin Lin,Ying-Qun Chen,Ping Yang,Jin-Ming Xu.  World Journal of Gastroenterology. 2016(22)
[10]抗肿瘤药物研究进展[J]. 张海龙.  世界最新医学信息文摘. 2016(31)



本文编号：3487788