酶敏感的肿瘤靶向siRNA递释系统研究

发布时间：2021-11-19 13:28

　　目的:RNA干扰技术（RNAi）通过调节目的基因的表达来发挥治疗效果,为癌症治疗提供了新的方法。但siRNA的物理化学特性使其不易透过细胞膜而难以发挥药效。为此研究人员开发了许多siRNA的递送体系以期改善其治疗效果。但多数递送体系尚存在着转染效率低,脱靶效应等问题。本研究构建了双重酶敏感型抗体靶向的siRNA递释体系（siRNA-LMWP-Linker-Antibody）,以期利用穿膜肽的促渗透作用进行siRNA的跨膜运输,同时借助特异性抗体和肿瘤酶实现siRNA的高效靶向递送及定点释放,最终改善siRNA的治疗效果。内容:本研究以结肠癌为模型,以肿瘤表面特异性表达的抗原和内肽酶为双重靶标,构建具有“前药”特性的siRNA递释系统siRNA-LMWP-Linker-Antibody。体系将穿膜肽（LMWP）与siRNA共价偶联构建前体药物,并以此来促进药物的入胞及胞浆释放。随后利用癌细胞表面特异性过表达的Legumain酶的底物肽（Linker）连接该前体药物与抗体构建靶向递药体系。当体系在抗体介导作用下靶向至结肠癌细胞后,癌细胞表面的Legumain酶作为激活因子切断其底物肽Lin... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

前体药物siRNA-S-S-PEG-LMWP机理图

8 -80 °C 冰柜 ΜLT1386-3V,Thermo, America9 涡旋机 齐林贝尔仪器,Vortex-6,中国10 Milli-Q 超纯水仪 Millipore, America11Nano ZS Zetasizer 粒度分析仪Malvern Instruments,Malvern,UK12 生物安全柜 ESCO SVE-4A1,Esco Micro Pte. Ltd, Singapore13 细胞培养箱 Thermo Fisher Scientific, America14 激光扫描显微镜 Olympus FV-1000，Japan1.1.2 前体药物 siRNA-S-S-PEG-LMWP 的合成纯化本节内容主要阐述了前体药物 siRNA-S-S-PEG-LMWP 的合成方法。采用了三种方法对前体药物进行了合成（图 1.2），通过对纯化方式及 Linker 进行筛选同时对合成过程及最终前体药物的产率进行计算，初步确定合成前体药物的最佳路线。

图 1.3 siRNA-S-S-PEG(MAL)-LMWP 的纯化层析。（A）通过肝素柱纯化 SH-PEG-LMWP：（1）PEG(MAL)-LMWP；（2）Cys-PEG-LMWP；（3）PDP–PEG-LMWP。（B）通过离子交换色谱纯化siRNA-S-S-PEG(MAL)-LMWP：（1）肝素柱；（2）DEAE 柱。2 前体药物 siRNA-S-S-PEG(OPSS)-LMWP 的分离纯化结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]Improved method for synthesis of low molecular weight protamine–siRNA conjugate[J]. Zhili Yu,Junxiao Ye,Xing Pei,Lu Sun,Ergang Liu,Jianxin Wang,Yongzhuo Huang,Seung Jin Lee,Huining He.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2018(01)
[2]Cancer incidence and mortality in China in 2013:an analysis based on urbanization level[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Siwei Zhang,Hongmei Zeng,Tingting Zuo,Changfa Xia,Zhixun Yang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2017(01)
[3]用于基因和药物传递的多肽及聚多肽材料[J]. 陈荆晓,王慧媛,许小丁,陈巍海,张先正.  高分子学报. 2011(08)



本文编号：3505139