海洋来源化合物对神经细胞保护活性的筛选及作用机制研究

发布时间：2021-11-22 04:45

　　心脑血管疾病是困扰人类健康的头号公敌,据不完全统计,全球每年约有1750万人死于心脑血管疾病,占所有死亡人数的1/3。艾美仕医药健康（IMS Health）研究机构估计,到2020年全球将有2500万人死于心脑血管疾病。而受困于心脑血管疾病的人群更是难以估计。神经退行性疾病是心脑血管疾病的重要分支,其主要表现为大脑和脊髓神经元随着人体老化而逐渐死亡所产生的认知以及运动功能性障碍,目前的研究尚不能清楚解释发病的原因和机理。目前发病率较高的三类神经退行性疾病为：阿兹海默症、帕金森症和肌萎缩侧索硬化症,其病症的初期表现分别为：短期记忆衰退、运动迟缓和肌无力,发展到后期会出现：记忆障碍、小脑萎缩和肌肉萎缩,严重影响了人类健康和生活质量。当前对于神经退行性疾病的研究还很有限,无法做的疾病治愈。市售药物主要集中在两类：拟神经递质类药物和神经递质代谢酶抑制剂,具有作用靶点单一、毒副作用大、易产生耐药性等缺点。因此,获得低毒性的替代治疗药物一直是研究热点,也是本论文的研究重点之一。海洋药物资源有着广阔的开发前景,由于海洋特殊的理化环境,涌现了一大批结构新颖,功能特殊,具有成药前景的天然产物。壳寡糖是经... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：145 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
前言
    1. 神经退行性疾病的分类及特点
        1.1 阿兹海默症的简介及可能的发病机制
        1.2 肌肉萎缩侧索硬化症的简介及可能的发病机制
        1.3 帕金森症的简介及可能的发病机制
        1.4 亨廷顿症的简介及可能发病机制
    2. 神经退行性疾病研究现状
        2.1 神经退行性疾病之间的联系
            2.1.1 遗传学上的相关性
            2.1.2 蛋白水平的相关性
                2.1.2.1 功能蛋白的积聚
                2.1.2.2 蛋白降解的途径
            2.1.3 病理表现的相关性
                2.1.3.1 线粒体功能障碍
                2.1.3.2 轴突运输障碍
                2.1.3.3 细胞的程序化死亡
        2.2 神经退行性疾病的研究方法
            2.2.1 常见的细胞模型
            2.2.2 常见的动物模型
            2.2.3 致病假说
        2.3 神经退行性疾病的治疗药物及潜在治疗方案
    3. 壳寡糖简介
    4. 虾青素简介
    5. 糖胺聚糖与神经系统发育的关系
    6. 课题研究方法、目的及意义
    参考文献
第一章 PC12细胞分化培养及细胞损伤模型的建立
    1. 实验材料和仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2. 实验步骤
        2.1 PC-12细胞的体外培养
        2.2 NGF诱导细胞分化
        2.3 NGF诱导浓度筛选
        2.4 细胞周期测定
        2.5 Western blot检测
        2.6 免疫荧光共聚焦检测
        2.7 体外神经细胞损伤模型的建立
        2.8 数据处理
    3. 实验结果与讨论
        3.1 NGF分化诱导浓度的选择
            3.1.1 不同浓度NGF的分化诱导率
            3.1.2 不同浓度NGF对PC12神经突起的影响
            3.1.3 不同浓度NGF对PC12细胞活力的影响
        3.2 细胞周期
        3.3 周期相关蛋白的表达变化
        3.4 PC12交感神经元活性检测
        3.5 体外细胞模型的建立
        3.6 细胞模型稳定性
    4. 本章小结
    参考文献
第二章 壳寡糖及其修饰物对神经细胞的保护作用
    1 实验材料和仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 PC12细胞体外培养
        2.2 样品细胞毒性测定
        2.3 样品对谷氨酸诱导细胞损伤的保护
        2.4 LDH、ROS、MMP指标测定
        2.5 Caspase 3,9酶活力检测
        2.6 Western blot检测
        2.7 免疫荧光共聚焦检测
        2.8 数据处理
    3 实验结果与讨论
        3.1 样品细胞毒性测定
        3.2 样品对谷氨酸诱导细胞损伤的保护作用
        3.3 LDH、ROS、MMP测定
        3.4 全乙酰化壳寡糖对于神经细胞凋亡的影响
    4 本章小结
    参考文献
第三章 虾青素的神经保护作用研究
    1. 实验材料和仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2. 实验方法
        2.1 PC12细胞的体外培养
        2.2 虾青素细胞毒性测试
        2.3 虾青素对谷氨酸诱导PC12凋亡的保护作用
        2.4 LDH和ROS的测定
        2.5 SOD,GR,GPX的测定
        2.6 细胞凋亡检测
        2.7 MMP测定
        2.8 Western blot检测
        2.9 Ca(2+)荧光共聚焦测试和NF-κB免疫荧光测试
        2.10 数据处理
    3. 实验结果与讨论
        3.1 虾青素细胞毒性测定
        3.2 虾青素对于谷氨酸神经细胞损伤的抑制作用
        3.3 虾青素对谷氨酸损伤PC12细胞LDH和ROS释放的影响
        3.4 虾青素对谷氨酸损伤PC12细胞SOD,GR,GPx酶活性的影响
        3.5 虾青素对线粒体膜电位的影响
        3.6 虾青素对神经细胞凋亡的影响
        3.7 虾青素对Ca~(2+)内流的影响
        3.8 细胞凋亡相关蛋白表达的检测
        3.9 虾青素对NF-κB和MAPK信号通路的影响
    4. 本章小结
    参考文献
第四章 海洋来源生物碱结构类似物神经保护活性筛选
    1. 实验材料和仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2. 实验方法
        2.1 PC12细胞的体外培养
        2.2 海洋生物碱类似物细胞毒性测试
        2.3 海洋生物碱类似物对谷氨酸诱导PC12凋亡的保护作用
    3. 实验结果及讨论
        3.1 Neolamellarin A类似物的神经细胞毒和保护活性
        3.2 Naamidine A类似物的神经细胞毒和保护活性
    4. 本章小结
    参考文献
第五章 糖胺聚糖在PC12分化过程中的含量和组成变化
    1. 实验材料和仪器
        1.1 实验材料
        1.2 实验仪器
    2. 实验步骤
        2.1 PC12分化培养
        2.2 FGF因子结合实验
        2.3 分化PC12细胞糖胺聚糖的提取
        2.4 硝酸纤维素薄膜电泳
        2.5 HPLC、HPLC-MS分析提取的糖胺聚糖单糖组成和含量
            2.5.1 样品的水解
            2.5.2 PMP衍生化反应
            2.5.3 色谱条件
            2.5.4 质谱条件
    3. 实验结果与讨论
        3.1 FGF因子结合实验
        3.2 糖胺聚糖电泳实验
        3.3 糖胺聚糖的液相色谱分析
    4. 本章小结
    参考文献
结论
创新点
致谢
个人简历
发表和参与发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]Proteoglycans: Road Signs for Neurite Outgrowth[J]. Justin A.Beller,Diane M.Snow.  Neural Regeneration Research. 2014(04)
[2]干细胞治疗神经退行性疾病的前景与问题[J]. 熊杰,宁丽娜,王再领,石学敏.  中国组织工程研究. 2013(19)
[3]帕金森病体外细胞模型[J]. 李婷婷,梁迎春.  医学综述. 2013(06)
[4]氯化铜过度负荷对星形胶质细胞的氧化损伤机制[J]. 胡皓璐,王晓平,赵艳玲.  中华临床医师杂志(电子版). 2011(11)
[5]阿尔茨海默病的神经免疫炎症发病机制及其治疗研究进展[J]. 马英,曹云鹏.  中国老年学杂志. 2010(21)
[6]阿尔茨海默病治疗药物的研究进展[J]. 郭静静,廖红.  中国药科大学学报. 2010(05)
[7]石杉碱甲对阿尔茨海默病细胞模型的防护作用[J]. 程永杰,李红杰,孙肖爽,余莉,畅美季,徐晓燕.  中国老年学杂志. 2010(17)
[8]壳寡糖与Aβ-Cu复合物相互作用的研究方法[J]. 徐魏,戴雪伶,黄汉昌,耿洁敏,姜招峰.  北京联合大学学报(自然科学版). 2009(04)
[9]20（S）-O-喜树碱肉桂酸酯衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究[J]. 段华鑫,张殊佳,周鹏.  有机化学. 2009(05)
[10]壳寡糖可降低阿尔茨海默症模型细胞内活性氧水平[J]. 张光,张秀芳,公衍道.  生物物理学报. 2009(02)

博士论文
[1]多巴胺受体激动剂在帕金森模型中的神经保护机制研究[D]. 李超.山东大学 2010

硕士论文
[1]NRAGE通过TrkA/MEK/ERK和AKT信号通路抑制NGF诱导的PC12细胞分化[D]. 冯振华.南京师范大学 2007



本文编号：3510966