核心蛋白聚糖中复杂糖胺聚糖链结构及其抗肿瘤活性的初步研究

发布时间：2017-05-08 16:08

  本文关键词：核心蛋白聚糖中复杂糖胺聚糖链结构及其抗肿瘤活性的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：核心蛋白聚糖(Decorin),由一个核心蛋白和一条糖胺聚糖链共价连接而成,是细胞间基质中的组分,可以和许多细胞表面受体和其它细胞间基质组分相互作用从而发挥多种生物活性,尤其是抗肿瘤活性。近年来,对Decorin的临床研究有很多,它的临床应用价值日益明显,作为一种天然大分子,人们正期待着它能够成为一种有效的抗肿瘤药物应用于临床。随着人们对Decorin关注的增多以及现代研究水平的进步,Decorin的结构研究有了进一步的发展。一直以来,Decorin的核心蛋白部分被研究的比较多,它的序列解析和空间结构已相对明确,而糖胺聚糖链由于其结构极其复杂且具有组织特异性,对它的研究目前并不完全清楚。本课题针对Decorin的糖胺聚糖链围绕以下问题进行展开:1.Decorin糖胺聚糖链具有怎样的结构?2.不同组织来源的Decorin是否具有不同的糖胺聚糖链结构?3.具有不同糖胺聚糖链结构的Decorin是否会产生不同的生物学活性?针对以上问题,该工作首先针对不同来源Decorin制备方法进行了大量的尝试;之后通过微量二糖分析和建立的高效微量液质联用寡糖分析方法对两种来源的Decorin糖胺聚糖链进行了结构解析与比较;最后本实验以肺癌细胞H1299作为研究模型,分别从其增殖与迁移两方面考察了不同来源核心蛋白(Decorin-C和Decorin-D)的抗肿瘤作用。该工作首先建立了一套高效和完善的制备工艺,分别从猪软骨和猪皮组织中制备得到了一定量的Decorin样品,具有较高的得率。该工艺为Decorin的后续研究奠定了非常扎实的基础。其次,该工作建立了一套针对具有不同电荷密度糖胺聚糖寡糖的液质联用分析方法,并在Decorin糖胺聚糖寡糖分析工作中得到了应用,证实了不同来源的Decorin有着不同的CS/DS构成比例和序列。同时,通过微量二糖分析发现两种来源的Decorin糖胺聚糖在硫酸根分布上存在明显的差异。最后,该工作发现这两种具有不同糖胺聚糖结构的Decorin表现出了不同的抗肿瘤活性。以上工作标明不同糖基化Decorin表现出了不同的抗肿瘤活性。
【关键词】：核心蛋白聚糖(Decorin) 糖胺聚糖 结构解析 抗肿瘤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R917;R96
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 引言11-18
• 1.1 Decorin简介11-12
• 1.2 Decorin的生物学活性12-13
• 1.3 Decorin的抗肿瘤作用机制13-14
• 1.4 Decorin的临床研究现状14-15
• 1.5 Decorin的结构研究15-17
• 1.5.1 Decorin中核心蛋白结构研究15-16
• 1.5.2 Decorin中GAG链结构解析16-17
• 1.6 本论文研究的主要内容17-18
• 第二章Decorin的制备工艺建立18-38
• 2.1 前言18-20
• 2.2 组织匀浆及蛋白提取20-22
• 2.2.1 基本原理-蛋白变性提取20
• 2.2.2 实验部分20-22
• 2.2.3 实验结果与分析22
• 2.3 蛋白样品的分离22-25
• 2.3.1 基本原理— 强阴离子交换色谱22-23
• 2.3.2 实验部分23-24
• 2.3.3 实验结果与分析24-25
• 2.4 蛋白样品的纯化25-29
• 2.4.1 基本原理-切向流超滤器25-27
• 2.4.2 实验部分27
• 2.4.3 实验结果与分析27-29
• 2.5 Decorin样品的纯度分析29-32
• 2.5.1 基本原理29-30
• 2.5.2 实验部分30-32
• 2.5.3 实验结果与分析32
• 2.6 样品的western验证32-35
• 2.6.1 基本原理—western blot32-33
• 2.6.2 实验部分33-35
• 2.6.3 实验结果与分析35
• 2.7 本章总结35-38
• 第三章Decorin糖胺聚糖链的结构解析38-59
• 3.1 前言38
• 3.2 Decorin糖胺聚糖链的制备38-42
• 3.2.1 糖胺聚糖链的制备38-40
• 3.2.2 Decorin糖胺聚糖链凝胶电泳分析40-42
• 3.2.3 实验结果与分析42
• 3.3 Decorin糖胺聚糖链的二糖分析42-48
• 3.3.1 基本原理（反相离子对色谱法）42-43
• 3.3.2 实验部分43-45
• 3.3.3 实验结果与分析45-48
• 3.4 Decorin糖胺聚糖链的寡糖分析（新建色谱方法的应用）48-57
• 3.4.1 前言-糖胺聚糖寡糖高效分析方法的开发与建立48-52
• 3.4.2 基本原理（HILIC）52
• 3.4.3 实验部分52-54
• 3.4.4 实验结果与分析54-57
• 3.5 本章总结57-59
• 第四章Decorin生物活性测试59-66
• 4.1 前言59
• 4.2 细胞增殖抑制实验59-61
• 4.2.1 实验原理-磺酰罗丹明B（sulforodamine B，， SRB） 法59-60
• 4.2.2 仪器与试剂60
• 4.2.3 实验方法60-61
• 4.2.4 实验结果与分析61
• 4.2.5 讨论61
• 4.3 细胞迁移61-64
• 4.3.1 实验原理- Transwell迁移实验原理61-62
• 4.3.2 仪器与试剂62
• 4.3.3 实验方法62-63
• 4.3.4 结果与分析63-64
• 4.4 讨论64-66
• 论文总结与展望66-67
• 参考文献67-73
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文73-74
• 致谢74-75

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