二甲双胍抑制巨噬细胞M2型极化及协同CDK4/6抑制剂抗肿瘤转移作用研究

发布时间：2021-12-22 04:10

　　研究背景:肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophage,TAM）是肿瘤微环境基质细胞中重要的组成部分,具有可塑性强和功能多样的特点。TAM可受肿瘤微环境影响,被极化为分子特征及生物学功能完全不同的两大类TAM亚群,即发生经典极化（Classical polarization）的 M1 型 TAM 以及发生替代极化（Alternative polarization）的M2型TAM,其中M1型TAM发挥抗肿瘤作用,而M2型TAM则加速了肿瘤的发生和演进。M2型极化状态下的TAM能够大量合成与释放抗炎细胞因子、免疫抑制因子和多种可以促进肿瘤细胞发生、生长、迁移以及血管淋巴管形成的各种细胞因子,从而进一步促进血管的生成和细胞外基质分解和重塑并促进肿瘤细胞运动。而且巨噬细胞和肿瘤细胞之间的直接交流会导致肿瘤细胞入侵和转移进入血管。因此,M2型巨噬细胞在促肿瘤转移的微环境中扮演关键作用,是肿瘤治疗的重要靶点。目前靶向肿瘤相关巨噬细胞的治疗研究主要有三个方向,一是通过抑制TAM的增殖、存活和招募减少TAM的数量;二是干预TAM的M2型极化;三是调节TAM的吞噬功能。目前针... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
绪论
第一章 二甲双胍抑制巨噬细胞M2型极化及其机制
    1.1 引言
    1.2 实验材料与仪器
        1.2.1 细胞株
        1.2.2 实验动物
        1.2.3 药物与主要试剂
        1.2.4 实验仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 细胞培养
        1.3.2 小鼠原代骨髓来源巨噬细胞的分离及诱导培养
        1.3.3 SRB法检测细胞增殖
        1.3.4 流式细胞术
        1.3.5 实时荧光定量PCR
        1.3.6 siRNA转染
        1.3.7 Western Blot法检测蛋白表达
        1.3.8 统计学分析
    1.4 实验结果
        1.4.1 二甲双胍抑制巨噬细胞M2型极化
            1.4.1.1 二甲双胍抑制RAW264.7的M2型极化
            1.4.1.2 二甲双胍抑制BMDM的M2型极化
            1.4.1.3 二甲双胍抑制THP1的M2型极化
        1.4.2 二甲双胍不影响巨噬细胞的M1型极化
        1.4.3 二甲双胍通过激活AMPKα1抑制巨噬细胞M2型极化
    1.5 讨论
第二章 二甲双胍通过抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗肿瘤转移作用
    2.1 引言
    2.2 实验材料与仪器
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 实验动物
        2.2.3 药物与主要试剂
        2.2.4 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 分离及诱导培养小鼠原代骨髄来源巨噬细胞
        2.3.3 条件培养基制备
        2.3.4 SRB实验检测细胞增殖
        2.3.5 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.3.6 Transwell小室迁移实验
        2.3.7 实时荧光定量PCR
        2.3.8 小鼠肺毛细血管内皮细胞分离与纯化
        2.3.9 划痕修复实验
        2.3.10 管腔形成实验
        2.3.11 动物实验
        2.3.12 苏木素&伊红染色法
        2.3.13 免疫荧光
        2.3.14 免疫组化
        2.3.15 CCL2分泌水平检测
        2.3.16 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 二甲双胍抑制M2型巨噬细胞极化对肿瘤细胞增殖运动能力的影响
        2.4.2 二甲双胍抑制M2型巨噬细胞极化对内皮细胞增殖运动管腔形成能力的影响
        2.4.3 二甲双胍通过抑制巨噬细胞M2型极化抑制肿瘤转移
            2.4.3.1 二甲双胍对小鼠Lewis肺癌肺转移模型的作用研究
                2.4.3.1.1 二甲双胍抑制LLC细胞腋下接种模型中肿瘤细胞的肺转移
                2.4.3.1.2 二甲双胍抑制LLC细胞尾静脉接种模型中肿瘤细胞的肺转移
                2.4.3.1.3 二甲双胍可在体内降低肿瘤组织中的M2型巨噬细胞比例
                2.4.3.1.4 二甲双胍可在体内增加血管的成熟度
            2.4.3.2 二甲双胍对小鼠乳腺癌4T1原位接种模型的作用研究
                2.4.3.2.1 二甲双胍抑制小鼠乳腺癌4T1原位接种模型中肿瘤细胞的肺转移
                2.4.3.2.2 二甲双胍可减少小鼠乳腺癌组织中的M2型巨噬细胞
    2.5 讨论
第三章 二甲双胍协同瑞博西尼发挥抗肿瘤转移作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 实验动物
        3.2.3 药物与主要试剂
        3.2.4 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 分离及诱导培养小鼠原代骨髓来源巨噬细胞
        3.3.3 SRB实验检测细胞增殖
        3.3.4 流式细胞术
        3.3.5 实时荧光定量PCR
        3.3.6 动物实验
        3.3.7 免疫组化
        3.3.8 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 评价多种小分子抑制剂对巨噬细胞M2型极化的作用
        3.4.2 瑞博西尼促进巨噬细胞M2型极化
            3.4.2.1 瑞博西尼促进RAW264.7细胞的M2型极化
            3.4.2.2 瑞博西尼促进BMDM的M2型极化
        3.4.3 二甲双胍协同瑞博西尼发挥抗肿瘤转移作用
        3.4.4 巨噬细胞参与二甲双胍协同瑞博西尼的抗肿瘤转移过程
    3.5 讨论
第四章 总结与展望
参考文献
综述 基于肿瘤相关巨噬细胞的肿瘤治疗策略研究进展
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果



本文编号：3545731