硝普钠诱导猪软骨细胞凋亡

发布时间：2022-01-01 04:20

　　[目的]研究硝普钠（Sodium nitroprusside, SNP）诱导猪软骨细胞凋亡的适宜剂量和作用时间,构建猪软骨细胞的凋亡模型。[方法]体外培养并鉴定猪踝关节软骨细胞。分别用0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的SNP处理软骨细胞。于12、24、48 h后分别检测软骨细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位。[结果]随SNP浓度增加,细胞增殖呈曲线改变,SNP在0.1 mmol/L时OD值达峰值,而后下降,不同浓度SNP组间差异有统计学意义（P<0.05）。相同SNP不同时间点的差异亦有统计学意义（P<0.05）。凋亡检测显示0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP处理的猪软骨细胞发生了凋亡,且凋亡率随SNP浓度的增大而加大。线粒体膜电位染色显示随着SNP浓度的增大,猪软骨细胞的红色荧光强度与绿色荧光强度的相对比值逐渐缩小。[结论] 0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L SNP均引发了猪软骨细胞凋亡,可以用于构建猪软骨细胞凋亡模型。且当SNP的浓度逐渐增大,猪软骨细胞的线粒体膜电位逐渐减小。 

【文章来源】：中国矫形外科杂志. 2020,28(15)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

激光共聚焦显微镜观察不同浓度SNP处理后的猪软骨细胞的jc-1染色（×200)a：此时红色荧光最强，细胞处于正常状态，线粒体膜电位最高b：红色荧光开始减弱且绿色荧光开始增强，细胞线粒体膜电位开始下降c：红色荧光进一步减弱且绿色荧光继续增强，细胞线粒体膜电位进一步下降d：红色荧光减弱速度和绿色荧光增强速率以及细胞线粒体膜电位下降速度均变缓e：绿色荧光达到最强，此时细胞线粒体膜电位最低f：各组间的红色和绿色相对荧光强度比值之间的差异有统计学意义（***P<0.001,n=6）；随着SNP浓度的增大，红光和绿光的相对荧光的比值逐渐减小，说明线粒体膜电位随着SNP的增大而逐渐降低

通过共聚焦显微镜观察经过JC-1染色的软骨细胞可以发现0 mmol/L SNP处理的软骨细胞的红色荧光远强于绿色荧光（图3a）。0.2、0.4、0.8、1.6mmol/L SNP处理的软骨细胞的绿色荧光明显增强，而红色荧光变化不明显（图3b～3e）。利用软件对各组的红色荧光和绿色荧光进行半定量且计算比较各组的红色荧光和绿色荧光的比值（图3f）。图3 激光共聚焦显微镜观察不同浓度SNP处理后的猪软骨细胞的jc-1染色（×200)a：此时红色荧光最强，细胞处于正常状态，线粒体膜电位最高b：红色荧光开始减弱且绿色荧光开始增强，细胞线粒体膜电位开始下降c：红色荧光进一步减弱且绿色荧光继续增强，细胞线粒体膜电位进一步下降d：红色荧光减弱速度和绿色荧光增强速率以及细胞线粒体膜电位下降速度均变缓e：绿色荧光达到最强，此时细胞线粒体膜电位最低f：各组间的红色和绿色相对荧光强度比值之间的差异有统计学意义（***P<0.001,n=6）；随着SNP浓度的增大，红光和绿光的相对荧光的比值逐渐减小，说明线粒体膜电位随着SNP的增大而逐渐降低

图3 激光共聚焦显微镜观察不同浓度SNP处理后的猪软骨细胞的jc-1染色（×200)a：此时红色荧光最强，细胞处于正常状态，线粒体膜电位最高b：红色荧光开始减弱且绿色荧光开始增强，细胞线粒体膜电位开始下降c：红色荧光进一步减弱且绿色荧光继续增强，细胞线粒体膜电位进一步下降d：红色荧光减弱速度和绿色荧光增强速率以及细胞线粒体膜电位下降速度均变缓e：绿色荧光达到最强，此时细胞线粒体膜电位最低f：各组间的红色和绿色相对荧光强度比值之间的差异有统计学意义（***P<0.001,n=6）；随着SNP浓度的增大，红光和绿光的相对荧光的比值逐渐减小，说明线粒体膜电位随着SNP的增大而逐渐降低图3 激光共聚焦显微镜观察不同浓度SNP处理后的猪软骨细胞的jc-1染色（×200)a：此时红色荧光最强，细胞处于正常状态，线粒体膜电位最高b：红色荧光开始减弱且绿色荧光开始增强，细胞线粒体膜电位开始下降c：红色荧光进一步减弱且绿色荧光继续增强，细胞线粒体膜电位进一步下降d：红色荧光减弱速度和绿色荧光增强速率以及细胞线粒体膜电位下降速度均变缓e：绿色荧光达到最强，此时细胞线粒体膜电位最低f：各组间的红色和绿色相对荧光强度比值之间的差异有统计学意义（***P<0.001,n=6）；随着SNP浓度的增大，红光和绿光的相对荧光的比值逐渐减小，说明线粒体膜电位随着SNP的增大而逐渐降低


本文编号：3561610