人甲状旁腺素（1-84）的表达及纯化

发布时间：2022-01-01 15:06

　　人甲状旁腺素（human parathyroid hormone）是由人甲状旁腺主细胞分泌出来的活性多肽,通过调节肾脏、骨骼等细胞来维持磷酸盐和血钙的自身的稳定。人甲状旁腺素1-84（PTH 1-84）含有84个氨基酸的多肽链分子,分子量是9.5 kDa。在人体内是由甲状旁腺主细胞产生的。调节人体的骨转换及磷、钙的代谢。近几年来的医学研究证明,PTH在用于治疗骨质疏松上有很好的临床应用价值,疗效也很好且没有其他副作用,而且还可以作为甲状腺功能亢进的取代药物。本文研究的PTH 1-84是通过基因工程重组技术开发的一种蛋白药物,生理作用为调节钙磷代谢,肾、骨和小肠是靶器官,维持人体血钙的稳定,作用靶点明确、机理清楚,主治绝经后妇女骨质疏松症。本文主要的研究内容包括以下几个方面:利用基因工程方法以E.coli BL-21为宿主菌,将人甲状旁腺素基因连接到pGEX-4T-1载体,形成重组质粒pGEX-4T-1-hPTH,导入宿主菌中,表达融合蛋白,通过对诱导条件和IPTG的浓度的优化,确定了最终的培养条件为:OD₆₀₀值为20开始诱导,IPTG的浓度为0.6 mM,诱导时... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 综述
    1.1 课题研究背景
    1.2 PTH的结构和功能
        1.2.1 甲状旁腺素的结构
        1.2.2 甲状旁腺素生理功能
        1.2.3 临床应用
    1.3 PTH的表达
    1.4 PTH(1-84)国内外的研究现状
        1.4.1 rhPTH(1-84)的药理、毒理研究
        1.4.2 rhPTH(1-84)的临床研究
    1.5 原核表达方法
        1.5.1 表达前的准备要素
        1.5.2 获得目的基因
        1.5.3 构建表达载体
        1.5.4 转化表达宿主菌
        1.5.5 诱导表达
        1.5.6 表达蛋白的分析、纯化、检测
    1.6 纯化方法的选择及组合
        1.6.1 凝胶层析
        1.6.2 离子交换层析
        1.6.3 亲和层析
        1.6.4 疏水层析
    1.7 本文研究的主要内容及意义
        1.7.1 本文研究的主要内容
        1.7.2 本文研究的意义
2 重组人甲状旁腺素1-84 的表达
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验方法
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 发酵生长曲线的测定
        2.3.2 7L发酵结果
        2.3.3 100L发酵工艺放大结果
    2.4 小结
3 重组人甲状旁腺素1-84 的纯化
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 实验结果及讨论
        3.3.1 菌体破碎及DEAE层析结果
        3.3.2 亲和层析
        3.3.3 超滤置换酶切缓冲液
        3.3.4 EK酶切条件优化
        3.3.5 Capto Q层析
        3.3.6 SP层析
        3.3.7 CM层析
    3.4 小结
4 人甲状旁腺素1-84 生物活性测定
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验试剂和材料
        4.2.2 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 试剂配制
        4.3.2 细胞准备
        4.3.3 样品处理
        4.3.4 加样
        4.3.5 ELISA检测
    4.4 实验结果及分析
        4.4.1 生物学活性计算
        4.4.2 判断标准
    4.5 小结
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨质疏松症治疗新药-甲状旁腺激素的研究进展[J]. 刘娟,王斌,张杰.  药物生物技术. 2004(03)
[2]骨质疏松骨折的住院治疗费用（1996～2001年）统计[J]. 符诗聪,胡建霖,罗仕华,许勇.  中国骨质疏松杂志. 2003(02)
[3]雌激素替代疗法的利与弊[J]. 王莉,孔德诚.  中国骨质疏松杂志. 2001(03)
[4]中国人骨质疏松症建议诊断标准(第二稿)[J].   中国骨质疏松杂志. 2000(01)
[5]北京市髋部骨折发生率流行病学研究[J]. 刘爱民,徐苓,赵熙和,陈孝曙,Steven R Cummings.  中华流行病学杂志. 1996(01)



本文编号：3562373