Ligase4修复他莫昔芬诱导人类淋巴母细胞DNA损伤的机制

发布时间：2022-01-02 01:43

　　目的研究他莫昔芬（TAM）诱导人类淋巴母细胞（TK6细胞）DNA损伤的机制。方法采用MTT法检测TAM对TK6细胞活性的影响;采用免疫荧光分析和染色体畸变试验研究TAM对TK6细胞的DNA损伤作用。结果 TAM对TK6细胞的存活率呈剂量依赖性抑制,与野生型细胞（WT）比较,敲除Ligase4基因的细胞(Ligase4^-/-)对TAM呈现出高度敏感性;与阴性对照组比较,TK6细胞经TAM处理后形成了明显增多的DNA损伤;Ligase4^-/-与WT比较,形成了显著增多的DNA损伤。结论 TAM可以诱导TK6细胞产生DNA损伤,Ligase4参与了TAM诱导的DNA损伤修复。 

【文章来源】：华西药学杂志. 2020,35(01)CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

WT TK6细胞核中γ-H2AX foci表达的免疫荧光染色照片(A)与细胞中染色体畸变核型分析图(B)(×1000,箭头所示为染色体断裂)

为了探究NHEJ功能缺陷细胞Ligase4-/-对TAM的敏感性是否与TAM诱导的DNA损伤相关,对相同条件处理后的Ligase4-/-与WT细胞中形成的γ-H2AX foci进行了比较分析。根据测得的药物剂量-细胞存活率曲线,选取25 μmol·L-1 TAM对细胞进行处理,并以15 nmol·L-1 ETP作为阳性对照。经统计分析发现:在各检测时间点(3、6、9 h),与WT比较,Ligase4-/-均形成了明显增多的γ-H2AX foci,尤其在峰值6 h的时候,Ligase4-/-平均每个细胞中γ-H2AX foci的数目超过了12个,而WT中只有不到7个(P<0.05)。这种趋势与阳性药ETP相似(图4)。结果表明:与WT比较,TAM诱导Ligase4-/-形成了更多的DNA损伤,因此,推测Ligase4-/-表现出的对TAM的敏感性可能与TAM诱导的DNA损伤相关。1.2.5 染色体畸变的比较分析

为了进一步验证Ligase4-/-对TAM的敏感性是否与TAM诱导的DNA损伤相关,采用染色体畸变分析方法对相同条件处理后的Ligase4-/-与WT细胞中形成的染色体畸变数目进行了比较分析。按“1.2.3”项下染色体畸变试验方法,用25 μmol·L-1 TAM对细胞进行处理,并以15 nmol·L-1 ETP作为阳性对照。统计结果显示:Ligase4-/-在12、24、36 h各检测时间点均比WT形成了更多的染色体畸变,尤其是在峰值24 h,Ligase4-/-染色体畸变的数目显著高于WT(P<0.05)。这种趋势与阳性药ETP相似(图5)。结果表明:经TAM处理后,Ligase4-/-比WT细胞形成了更多的DNA损伤,从而进一步验证了Ligase4-/-表现出的对TAM的敏感性可能与TAM诱导的DNA损伤相关。1.2.6 统计学分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]白藜芦醇诱导DT40细胞DNA损伤的机制研究[J]. 胡晓青,刘颖,卿勇.  华西药学杂志. 2018(01)
[2]芹黄素联合紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞株增殖、迁移及凋亡的影响[J]. 王阳,齐庆涛.  华西药学杂志. 2015(01)
[3]他莫昔芬磁性微球的制备及体外评价[J]. 刘让如,陈德梅,黄艳,王勇,张俊清.  华西药学杂志. 2012(03)
[4]依托泊苷口服微乳的制备及质量评价[J]. 王杏林,尹东东,张俊伟.  华西药学杂志. 2009(02)



本文编号：3563223