左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外研究

发布时间：2017-05-11 16:22

  本文关键词：左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨喹诺酮类药物对纤维环细胞的作用。方法:这项研究的目的是以离体实验探讨左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的影响。酶消化法来原代培养大鼠的纤维环细胞,贴壁的细胞融合为单层时,用含有EDTA的0.2%的胰蛋白酶消化后传代培养.当细胞传至第3代时,以不含胎牛血清以及酚红的DMEM/F12培养液来培养细胞,按照以下浓度来分组实验,每组为5到6个样本。对照组:以不含左氧氟沙星的培养液处理;30μg/ml组:加入浓度为30μg/ml的左氧氟沙星干预;60μg/ml组:加入浓度为60μg/ml的左氧氟沙星干预,90μg/ml组:加入浓度为90μg/ml的左氧氟沙星干预,细胞培养24小时后,应用:(1)应用倒置相差显微镜来观察大鼠的纤维环细胞形态;(2)用实时定量PCR的法来检测纤维环细胞中的caspase-3蛋白和MMP-3蛋白相关基因表达情况;(3)western印迹法对caspase-3蛋白与MMP-3蛋白定量检测;(4)应用流式细胞学技术来进行大鼠纤维环细胞最终凋亡率的检测。(5)运用MTS方法测定细胞增殖活力,(6)caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。大鼠的纤维环细胞分别以浓度为(0,30,60,and 90μg/ml)的左氧氟沙星处理,随即研究左氧氟沙星对其可能的细胞毒性作用。结果:(1)原代大鼠的纤维环细胞多呈现出多角形与长梭形,且轮廓明显,细胞核呈现出圆形以及椭圆形,细胞质内可见有分泌颗粒,24~48 h后细胞可贴壁生长,7~8 d细胞即进入其对数生长期,可传6~8代。经左氧氟沙星作用过的细胞可观察出细胞皱缩、空泡形成等凋亡征象。(2)以流式细胞学技术观察大鼠纤维环细胞在不同浓度的左氧氟沙星处理下的细胞形态结果显示,左氧氟沙星在浓度为0μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为2.70%?0.32%左氧氟沙星在浓度为30μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为6.41%?0.33%,左氧氟沙星在浓度为60μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为9.35%?0.64%,左氧氟沙星在浓度为90μg/ml时大鼠纤维环细胞的凋亡率为12.83%?0.67%,差异具有统计学意义。即左氧氟沙星是以浓度依赖的方式引起了大鼠纤维环细胞的凋亡率逐渐升高。(3)用caspase-3活性检测试剂盒(碧云天)来检测细胞中caspase-3的活性,结果显示在浓度依次为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml左氧氟沙星的条件下,细胞caspase-3的活性与对照组相比较分别提高到3.1倍、3.9倍、4.5倍、6.4倍。差异具有统计学意义。(4)通过MTS方法检测细胞活力,结果显示左氧氟沙星浓度为10、20、40、80μg/ml时,细胞的活力分别降低到95.8%,91.5%,88.2%,and 83.2%。差异具有统计学意义。(5)用Western blot技术来检测大鼠纤维环细胞中的caspase-3蛋白在不同浓度的左氧氟沙星处理下的表达。其结果显示:当对照组、左氧氟沙星浓度依次为30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml时的灰度值(/β-actin)分别为:0.19?0.03、0.28?0.02、0.39?0.02、0.49?0.03。Western blot技术检测大鼠纤维环细胞中的MMP-3蛋白在不同浓度左氧氟沙星处理下的表达情况为表达如下,当对照组、左氧氟沙星组的浓度依次为30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml时的灰度值(/β-actin)依次为:0.21?0.05、0.45?0.06、0.61?0.03、0.81?0.03。其组间差异具有统计学意义。(6)实时定量PCR检测caspase-3蛋白的基因表达情况,结果显示,对照组、左氧氟沙星浓度30、60、90μg/ml的相对ct值(/β-actin)分别为:0.19?0.03、0.31?0.06、0.65?0.04、0.78?0.06。实时定量PCR检测MMP-3蛋白的基因表达情况,结果显示,对照组、左氧氟沙星浓度30、60、90μg/ml的相对ct值(/β-actin)分别为:0.21?0.05、0.45?0.06、0.61?0.03、0.81?0.03。其组间差异具有统计学意义。结论:研究结果表明,左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞有细胞毒性作用--通过增加细胞的凋亡,降低细胞的活力,提高caspase-3、MMP-3等凋亡蛋白的表达率。提示了喹诺酮类药物对大鼠纤维环细胞的潜在的毒性作用。
【关键词】：左氧氟沙星 腰椎退变凋亡 纤维环细胞 基质金属蛋白酶 caspase-3
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-18
• 结果18-20
• 附图20-24
• 附表24-25
• 讨论25-27
• 结论27
• 参考文献27-32
• 综述 喹诺酮类药物及其化合物诱导细胞凋亡的研究进展32-38
• 参考文献36-38
• 致谢38-39
• 个人简历39

【参考文献】

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1 付建民;王德辉;孙金平;康玉华;皇甫超申;胡国强;刘彬;;对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用[J];中国药理学通报;2011年06期

2 任争;康玉华;石贞玉;皇甫超申;胡国强;刘彬;;肉桂醛氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用[J];药学学报;2010年09期

  本文关键词：左氧氟沙星对大鼠纤维环细胞的毒性作用的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：357646