重组多肽VIP-TAT（M/L）的制备及其抗神经细胞凋亡的活性与机制研究
发布时间：2022-01-09 05:13
目的:血管活性肠肽（Vasoactive intestinal peptide,VIP）作为一种脑肠肽,与神经肽垂体腺苷酸环化酶激活多肽（Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP）具有高度同源性;对神经退行性疾病,如阿尔茨海默症等的治疗具有潜在的应用价值。VIP可通过非特异性的跨膜作用穿越血脑屏障（Blood–brain barrier,BBB）,但是其在体内较短的半衰期和较低的穿越生物屏障的效率阻止其在中枢神经系统中的应用。TAT由11个氨基酸残基组成,是一种具有有效提高生物屏障穿越作用的穿膜肽（Cell penetrating peptide）。本文利用基因工程原理及技术构建能有效穿越BBB的重组蛋白质VIP-TAT（M/L）,利用蛋白内含肽介导蛋白纯化相关技术实现其制备;通过建立神经细胞凋亡模型,检测重组多肽VIP-TAT（M/L）的抗凋亡能力;并进一步对其抗神经细胞凋亡机制进行探索。方法:通过设计编码VIP-TAT（M/L）的基因,克隆到表达载体pKYB,构建重组表达载体p KYB-VIP-TAT（M/L）...
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PTD的功能Fig.1-1ThefunctionofPTD
症免疫治疗等研究领域均具有良好的应用前景。.3 蛋白内含肽介导纯化.3.1 蛋白内含肽简介蛋白内含肽(intein)是 20 世纪 90 年代发现的一种新的蛋白功能元件[68,69]。它存在于前体蛋白质的多肽链内部一段氨基酸序列。在转变为成熟蛋白质时，通过非酶促的转应即通过自身催化作用将其两端(N 端和 C 端)的蛋白外显肽(extein)连接，而自身则从蛋白质中脱落下来，此过程不需要任何能量、辅助因子和酶，该过程主要涉及到化学重排，蛋白质自剪切过程完全由蛋白质内含子的氨基酸介导，与内含子的氨基酸序列量以及位置有关[70]。自从 1990 年从啤酒酵母(S.cerevisiae)中发现了第 1 个蛋白内含肽，陆续在古细菌、单细胞真核生物、真细菌中相继发现了大约 120 种的蛋白内含肽。内含肽结构(见 Fig.1-2)。
暨南大学硕士学位论文会完全被封阻。 (2) 通过剪切位点 C 末端的半胱氨酸或丝分枝酯键中间体。剪切连接处下游半胱氨酸的巯基或丝氨酸剪切处的前面的羰基碳原子，导致 N 端 extein转移到 C 端 ex结构的形成是可逆的。 (3) InteinC 末端剪切处的天冬酰胺分枝酯键中间体断裂, 产生带有 C 末端琥珀酰亚胺环的 intein。倒数第二个氨基酸组氨酸对于邻近天冬酰胺的环化有辅基酸时，会影响 C 末端的切割反应。 (4) 琥珀酰亚胺环水解N 或 S－N 酰基重排，产生稳定自然的肽键[71]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽[J]. 唐波,黄定德,郑磊,任浩,李前伟. 第三军医大学学报. 2013(01)
[2]包涵体蛋白的分离和色谱法体外复性纯化研究进展[J]. 王增,马会勤,张文,陈尚武. 中国生物工程杂志. 2009(07)
[3]血管活性肠肽对类风湿关节炎作用的研究进展[J]. 司秀文,刘明,李梅,梁统,周克元. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(05)
[4]阿尔茨海默病的发病机制及药物治疗的进展[J]. 吴思缈,周黎明. 四川生理科学杂志. 2009(01)
[5]重组蛋白包涵体的研究进展[J]. 李军,刘美杰,李勇,窦忠英. 安徽农业科学. 2008(31)
[6]肠易激综合征患者结肠黏膜P物质、血管活性肠肽和肥大细胞的变化[J]. 陈晓敏,张燕华,毛峻岭,张赛森,陆伦根. 胃肠病学. 2008(04)
[7]隔姜灸对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠血管活性肠肽和白介素-10水平的影响[J]. 王轶,张燕生,杜炳林,钟馨. 云南中医中药杂志. 2008(04)
[8]抗菌肽的结构特征及其与活性的关系[J]. 刘琳,马廷方,祝永强,姚菊明. 药物生物技术. 2008(01)
[9]VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定[J]. 余榕捷,高媛,戴云,谭毅力,曾志宏,周天鸿,洪岸. 生物工程学报. 2006(06)
[10]包涵体复性研究进展(英文)[J]. 龚平生,罗贵民. 中国生物工程杂志. 2003(12)
博士论文
[1]血管活性肠肽调节小胶质细胞功能减少转基因AD小鼠老年斑沉积的实验研究[D]. 宋敏.第三军医大学 2007
硕士论文
[1]B族G蛋白偶联受体PAC1二聚化及其N端HSDCIF基序对其二聚化的影响[D]. 郭晓令.暨南大学 2013
[2]重组多肽VIP-TAT的制备及其抗东莨菪碱诱导的记忆缺失作用的研究[D]. 曾智星.暨南大学 2013
本文编号：3578031
【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PTD的功能Fig.1-1ThefunctionofPTD
症免疫治疗等研究领域均具有良好的应用前景。.3 蛋白内含肽介导纯化.3.1 蛋白内含肽简介蛋白内含肽(intein)是 20 世纪 90 年代发现的一种新的蛋白功能元件[68,69]。它存在于前体蛋白质的多肽链内部一段氨基酸序列。在转变为成熟蛋白质时，通过非酶促的转应即通过自身催化作用将其两端(N 端和 C 端)的蛋白外显肽(extein)连接，而自身则从蛋白质中脱落下来，此过程不需要任何能量、辅助因子和酶，该过程主要涉及到化学重排，蛋白质自剪切过程完全由蛋白质内含子的氨基酸介导，与内含子的氨基酸序列量以及位置有关[70]。自从 1990 年从啤酒酵母(S.cerevisiae)中发现了第 1 个蛋白内含肽，陆续在古细菌、单细胞真核生物、真细菌中相继发现了大约 120 种的蛋白内含肽。内含肽结构(见 Fig.1-2)。
暨南大学硕士学位论文会完全被封阻。 (2) 通过剪切位点 C 末端的半胱氨酸或丝分枝酯键中间体。剪切连接处下游半胱氨酸的巯基或丝氨酸剪切处的前面的羰基碳原子，导致 N 端 extein转移到 C 端 ex结构的形成是可逆的。 (3) InteinC 末端剪切处的天冬酰胺分枝酯键中间体断裂, 产生带有 C 末端琥珀酰亚胺环的 intein。倒数第二个氨基酸组氨酸对于邻近天冬酰胺的环化有辅基酸时，会影响 C 末端的切割反应。 (4) 琥珀酰亚胺环水解N 或 S－N 酰基重排，产生稳定自然的肽键[71]。
【参考文献】：
期刊论文
[1]噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽[J]. 唐波,黄定德,郑磊,任浩,李前伟. 第三军医大学学报. 2013(01)
[2]包涵体蛋白的分离和色谱法体外复性纯化研究进展[J]. 王增,马会勤,张文,陈尚武. 中国生物工程杂志. 2009(07)
[3]血管活性肠肽对类风湿关节炎作用的研究进展[J]. 司秀文,刘明,李梅,梁统,周克元. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(05)
[4]阿尔茨海默病的发病机制及药物治疗的进展[J]. 吴思缈,周黎明. 四川生理科学杂志. 2009(01)
[5]重组蛋白包涵体的研究进展[J]. 李军,刘美杰,李勇,窦忠英. 安徽农业科学. 2008(31)
[6]肠易激综合征患者结肠黏膜P物质、血管活性肠肽和肥大细胞的变化[J]. 陈晓敏,张燕华,毛峻岭,张赛森,陆伦根. 胃肠病学. 2008(04)
[7]隔姜灸对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠血管活性肠肽和白介素-10水平的影响[J]. 王轶,张燕生,杜炳林,钟馨. 云南中医中药杂志. 2008(04)
[8]抗菌肽的结构特征及其与活性的关系[J]. 刘琳,马廷方,祝永强,姚菊明. 药物生物技术. 2008(01)
[9]VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定[J]. 余榕捷,高媛,戴云,谭毅力,曾志宏,周天鸿,洪岸. 生物工程学报. 2006(06)
[10]包涵体复性研究进展(英文)[J]. 龚平生,罗贵民. 中国生物工程杂志. 2003(12)
博士论文
[1]血管活性肠肽调节小胶质细胞功能减少转基因AD小鼠老年斑沉积的实验研究[D]. 宋敏.第三军医大学 2007
硕士论文
[1]B族G蛋白偶联受体PAC1二聚化及其N端HSDCIF基序对其二聚化的影响[D]. 郭晓令.暨南大学 2013
[2]重组多肽VIP-TAT的制备及其抗东莨菪碱诱导的记忆缺失作用的研究[D]. 曾智星.暨南大学 2013
本文编号：3578031
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/3578031.html
最近更新
教材专著
