柱切换-液质联用法快速分析万古霉素原料的杂质谱

发布时间：2022-01-23 22:51

　　目的采用柱切换-液质联用法推断万古霉素原料中杂质的结构。方法采用Chromasil 100-5 C₁₈（4.6 mm×250mm,5μm）色谱柱,以三乙胺缓冲液（pH 3.2）-乙腈-四氢呋喃（92∶7∶1,V/V/V）为A相,以三乙胺缓冲液（pH 3.2）-乙腈-四氢呋喃（70∶29∶1,V/V/V）为B相,进行梯度洗脱分离杂质。在正离子模式下获取各杂质的质谱数据,结合糖肽类抗生素的普遍质谱裂解规律、降解反应原理,解析相关杂质的结构。结果推断出13种杂质的化学结构,其中6种为首次报道。总结了万古霉素、去甲基万古霉素、甲基化万古霉素分别与其2种β异构体的化学结构与色谱保留行为之间的规律。结论采用柱切换-LC/MSn法结合强制降解实验,可快速推断出万古霉素原料相关杂质的化学结构。 

【文章来源】：中国药学杂志. 2020,55(15)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

万古霉素和杂质3,5,8～11的推测结构式

色谱柱:Chromasil 100-5 C18(4.6 mm×250mm,5μm);流动相:A相:三乙胺缓冲液(取三乙胺4 m L，加水至2 000 m L，用磷酸调节p H值至3.2)-乙腈-四氢呋喃(92∶7∶1,V/V/V);B相:三乙胺缓冲液-乙腈-四氢呋喃(70∶29∶1);线性梯度洗脱:0～12.0 min维持A相100%,12.0～20.0 min B相增加至100%,20.0～26.0 min维持B相为100%,26.0～26.1 min升高A相至100%,26.1～40.0 min维持A相100%;流速:1.0 m L·min-1;柱温:30℃;进样体积:20μL;检测波长:280 nm。用于分离万古霉素原料及强制降解溶液中的杂质。1.4 柱切换-LC/MSn法

分析万古霉素的二级质谱，获取特征性质谱碎片，有助于杂质的质谱数据解析。将万古霉素原料约2 mg，用乙腈-水(1∶1)溶液稀释至50μg·m L-1,采用流动注射法，在正离子模式下通过多级质谱推测万古霉素的质谱裂解途径，见图5。图6显示了万古霉素[M+H]+峰(m/z 1 448.0)的一系列碎片离子，特征性碎片离子主要包括m/z 1 287.3(脱氨基糖)、m/z 1 143.3 (脱氨基糖与葡萄糖)、m/z 800.10(特征性母核离子)等碎片离子。图4 万古霉素样品在不同降解条件下的典型色谱图

【参考文献】：
期刊论文
[1]化学药品杂质谱控制的现状与展望[J]. 胡昌勤.  中国新药杂志. 2015(15)
[2]联合使用反相液相色谱,柱切换以及两性离子交换-反相亲水性相互作用混合模式色谱-质谱法分析抗生素中的杂质（英文）[J]. 卢丽,李进,金少鸿,胡昌勤.  Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2014(02)



本文编号：3605310