CRH相关肽通过调节PLA2的表达影响肿瘤细胞迁移和凋亡的机制研究

发布时间：2017-05-13 10:19

  本文关键词：CRH相关肽通过调节PLA2的表达影响肿瘤细胞迁移和凋亡的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)是一个含有41个氨基酸的多肽。CRH最初在神经系统中发现,它由下丘脑释放作用于垂体,促进垂体合成和释放促肾上腺皮质激素(Adrenocorticotropic Hormone,ACTH)参与机体应激反应。随后,研究人员发现CRH相关肽及其受体也广泛分布于外周并发挥重要作用。CRH相关肽主要有4个成员,即CRH,Urocortin(Ucn),Ucn2和Ucn3,它们主要通过CRHR1和CRHR2两种CRH受体发挥作用。近年来的研究表明,CRH相关肽及其受体存在于肿瘤组织中,它们能通过自分泌和旁分泌影响肿瘤的发生与发展,但是具体分子机制还不完全明确。本研究主要讨论CRH相关肽对肿瘤细胞迁移和凋亡的影响及其具体机制。第一部分Ucn对肝癌细胞迁移的影响及其机制研究Urocortin(Ucn)与CRH有45%的氨基酸序列相似,含有40个氨基酸,是CRH相关肽的成员。Ucn能与与CRHR1和CRHR2两种CRH受体结合参与多种病理生理过程,如炎症和肿瘤的发生与发展。Ucn能够调节两种PLA2的表达,即钙离子非依赖型磷脂酶A2(Ca2+-independent PLA2,i PLA2)和胞质型磷脂酶A2(cytosolic PLA2,c PLA2)的表达。大量的文献报道,磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)也参与炎症和肿瘤的发生和发展,尤其是i PLA2和c PLA2能够影响细胞迁移。本部分研究探讨了Ucn通过激活两种CRH受体对i PLA2和c PLA2表达的调节情况,以及Ucn调节通过调节PLA2的表达进而影响肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721迁移的机制。实验结果显示,Ucn能抑制i PLA2表达,这能被CRHR2阻断剂Anti-30所逆转;而Ucn促进c PLA2表达,这能被CRHR1阻断剂Anta所逆转。此外,Ucn能够抑制细胞迁移,用BEL抑制或si RNA干扰i PLA2能够增加Ucn抑制细胞迁移的效应;而Ucn单独处理或用Anti-30阻断CRHR2均能促进细胞迁移,用PYR或si RNA干扰c PLA2均能消除此效应。SMMC-7721细胞与Hep G2细胞不同,它几乎不表达CRHR1和CRHR2。因此在实验中分别将两种CRH受体转入SMMC-7721细胞,观察Ucn的效应。结果发现Ucn能够上调SMMC-7721-R1细胞的c PLA2表达而促进细胞迁移的效应,这种效应能被PYR所逆转;Ucn能够下调SMMC-7721-R2细胞的i PLA2表达并抑制细胞迁移,而BEL增加这种效应。此外,实验还发现给予NF-κB的抑制剂PDTC能够逆转Ucn上调c PLA2表达的效应。因此,NF-κB可能参与Ucn对c PLA2的表达调节过程及促进肿瘤迁移的过程。综上所述,Ucn能够激活CRHR2下调i PLA2表达并抑制细胞迁移,激活CRHR1上调c PLA2表达并促进细胞迁移。第二部分CRH相关肽影响前列腺癌细胞凋亡的机制研究研究表明CRH相关肽能够影响肿瘤细胞的生长过程,包括增殖和凋亡等,我们之前的研究结果表明激活CRHR1和CRHR2能够通过改变Bcl-2和Bax的蛋白表达、线粒体膜电位和caspase-9的活性影响RM-1细胞凋亡。本部分实验主要探讨了CRH相关肽通过c PLA2介导RM-1细胞凋亡的效应和具体机制。实验发现,CRH能浓度依赖性和时间依赖性地增加c PLA2的表达并能其m RNA的稳定性。与此相反,Ucn2能降低c PLA2的表达,但对c PLA2的m RNA稳定性没有影响。将CRHR1或CRHR2转入HEK-293细胞后发现,CRH能上调HEK-293-R1的c PLA2表达,这能被CRHR1的阻断剂Anta所逆转;而Ucn2下调HEK-293-R2的c PLA2表达,这能被CRHR2的阻断剂Anti-30所逆转。用si RNA干扰c PLA2能明显减弱CRH诱导的细胞凋亡和Bcl-2:Bax比值降低,而c PLA2的缺失则能促进Ucn2抑制细胞凋亡,增加Bcl-2:Bax的比值。将c PLA2的上游调节因子IL-1β和TNF-α分别敲除后发现,IL-1β缺失能逆转CRH诱导的c PLA2表达增加,IL-1β参与CRH对c PLA2表达的调节。然而IL-1β和TNF-α均不能逆转Ucn2对c PLA2表达的下调。此外,在本部分研究结果表明,CRH能促进c PLA2磷酸化,增加其活性。综上所述,CRH通过激活CRHR1上调c PLA2表达实现促进细胞凋亡的效应,Ucn2通过激活CRHR2下调c PLA2表达实现抑制细胞凋亡的效应。
【关键词】：Ucn CRH相关肽受体 磷脂酶A2 迁移 NF-κB 凋亡 CRH相关肽 CRHR 胞质型磷脂酶A2 IL-1β
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 Urocortin对肝癌细胞迁移的影响及其机制研究13-38
• 引言13-15
• 第一节 Ucn调节PLA2的表达并影响肝癌细胞的迁移15-27
• 1. 实验材料15-16
• 2. 实验方法16-20
• 3. 实验结果20-25
• 4. 讨论25-27
• 第二节 Ucn调节PLA2的表达及影响肝癌细胞的迁移机制研究27-37
• 1. 实验材料27-28
• 2. 实验方法28-29
• 3. 实验结果29-35
• 4. 讨论35-37
• 小结37-38
• 第二部分 CRH相关肽对前列腺癌细胞凋亡的影响及其机制研究38-58
• 引言38-40
• 第一节 cPLA_2介导CRH相关肽对RM-1 细胞凋亡的作用40-47
• 1. 实验材料40-41
• 2. 实验方法41-43
• 3. 实验结果43-46
• 4. 讨论46-47
• 第二节 CRH相关肽调节cPLA_2表达的机制研究47-57
• 1. 实验材料47-48
• 2. 实验方法48-49
• 3. 实验结果49-55
• 4. 讨论55-57
• 小结57-58
• 参考文献58-69
• 文献综述69-88
• 参考文献77-88
• 附录88-89
• 硕士在读期间发表文章情况89-90
• 致谢90

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本文编号：362297