肿瘤细胞线粒体靶向递药系统的构建及其抗肿瘤活性研究

发布时间：2022-02-16 12:43

　　阿霉素（doxorubicin,DOX）是临床常用的广谱抗肿瘤药物之一,疗效确切、价格低廉。但是由于其心脏毒性及高的耐药率严重限制它的临床应用。研究发现DOX除了作用于细胞核DNA外,线粒体也是其重要靶点。如果将DOX特异地递送到肿瘤细胞的细胞核及线粒体,便可以提高其疗效、降低全身毒副作用。很多人类肿瘤细胞如黑色素瘤、非小细胞肺癌、乳腺癌和前列腺癌等高表达Sigma受体,茴香酰胺（AA）是Sigma受体的选择性配体。经AA修饰的递药系统具有肿瘤主动靶向功能。目的:本研究以AA为肿瘤细胞特异性靶向配基,分别构建基于二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE）的酸敏胶束递药系统和基于聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）的酸敏纳米粒递药系统,将DOX递送至肿瘤细胞线粒体,以期提高DOX的抗肿瘤活性、逆转肿瘤耐药、降低DOX的全身毒副功能。方法:以DSPE、聚乙二醇（PEG）、对乙酰基苯甲酸、对甲氧基苯甲酰氯、胆固醇（CHOL）、三苯基溴化膦（triphenylphosphonium,TPP）、地喹氯铵（dequalinium,DQA）和DOX为原料,合成DOX线粒体靶向连接物DQA-DOX,以及AA-PE... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省211工程院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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英文摘要
前言
文献回顾
第一部分 基于DSPE酸敏胶束的肿瘤细胞线粒体靶向递药系统研究
    实验一 嵌段材料的合成及表征
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
        2 方法
            2.1 试剂除水
            2.2 茴香酰胺-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（AA-PEG-hyd-DSPE）的合成
                2.2.1 茴香酰胺-聚乙二醇连接物（AA-PEG-NH2）的合成
                2.2.2 茴香酰胺-聚乙二醇-对乙酰基苯甲酸连接物的合成
            2.3 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-肼连接物的合成
            2.4 AA-PEG-hyd-DSPE的合成
            2.5 地喹氯铵-阿霉素连接物（DQA-DOX）的合成
        3 结构表征
            3.1 N-(4′-甲氧基苯甲酰基)6氨基己酸
            3.2 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-肼
            3.3 AA-PEG-hyd-DSPE
            3.4 DQA-DOX
        4 讨论
    实验二 基于DSPE酸敏胶束的制备及其抗肿瘤活性研究
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
            1.3 细胞
        2 方法
            2.1 胶束的制备
            2.2 胶束载药量和包封率的测定
                2.2.1 测定DOX以及DQA-DOX标准曲线的绘制
                2.2.2 测定载药量与包封率
            2.3 胶束的表征
            2.4 临界胶束浓度(CMC)的测定
            2.5 胶束稳定性实验
            2.6 胶束体外释药实验
            2.7 胶束细胞毒性实验
            2.8 胶束对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
            2.9 胶束转运DOX在肿瘤细胞的分布
            2.10 胶束的体内抗肿瘤活性
        3 实验结果与讨论
            3.1 胶束的表征
            3.2 胶束稳定性
            3.3 胶束体外释药
            3.4 胶束的细胞毒性
            3.5 胶束对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
            3.6 胶束转运DOX在肿瘤细胞内的分布
            3.7 胶束的体内抗肿瘤活性
        4 讨论
第二部分 基于PLGA的肿瘤细胞线粒体靶向递药系统的研究
    实验一 嵌段材料的合成及表征
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
        2 方法
            2.1 试剂除水
            2.2 茴香酰胺-聚乙二醇-胆固醇连接物（AA-PEG-hyd-CHOL）的合成
                2.2.1 茴香酰胺-聚乙二醇连接物（AA-PEG-NH2）的合成
                2.2.2 茴香酰胺-聚乙二醇-对乙酰基苯甲酸的合成
            2.3 胆固醇琥珀酰肼的合成
                2.3.1 胆固醇琥珀酸单酯的合成
                2.3.2 胆固醇琥珀酰肼的合成
            2.4 AA-PEG-hyd-CHOL的合成
            2.5 三苯基膦-胆固醇连接物（TPP-CHOL）的合成
        3 结构表征
            3.1 胆固醇琥珀酰肼
            3.2 AA-PEG-hyd-CHOL
            3.3 TPP-CHOL
        4 讨论
    实验二 脂质修饰PLGA纳米粒的制备及其抗肿瘤活性研究
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
            1.3 细胞
        2 方法步骤
            2.1 脂质修饰PLGA纳米粒（LNPs）制备方法的优化
                2.1.1 超声功率的优化
                2.1.2 乳化剂浓度的优化
                2.1.3 超声时间对纳米粒的影响
                2.1.4 DOX投入量对纳米粒粒径及载药量的影响
            2.2 LNPs的制备
            2.3 LNPs载药量与包封率测定
                2.3.1 测定DOX标准曲线的绘制
                2.3.2 测定载药量与包封率
            2.4 LNPs的表征
                2.4.1 LNPs的粒径及形态表征
                2.4.2 LNPs表面元素分析
            2.5 LNPs稳定性实验
            2.6 环境pH对LNPs Zeta电位的影响
            2.7 LNPs的体外释药实验
            2.8 LNPs溶解红细胞膜作用
            2.9 LNPs细胞毒性实验
            2.10 LNPs对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
            2.11 LNPs转运DOX在肿瘤细胞的分布
            2.12 LNPs对线粒体膜电位的影响
            2.13 LNPs对细胞周期影响
            2.14 LNPs的体内抗肿瘤活性研究
        3 实验结果与讨论
            3.1 检测DOX标准曲线
            3.2 LNPs制备方法的化
                3.2.1 超声功率的优化
                3.2.2 乳化剂浓度的优化
                3.2.3 超声时间对纳米粒的影响
                3.2.4 DOX投入量的影响
                3.2.5 LNPs的制备
            3.3 LNPs的表征
            3.4 LNPs的稳定性实验
            3.5 环境pH对LNPs Zeta电位的影响
            3.6 LNPs体外释药
            3.7 LNPs溶解红细胞膜作用
            3.8 LNPs细胞毒性
            3.9 LNPs诱导肿瘤细胞凋亡作用
            3.10 LNPs转运DOX在肿瘤细胞内的分布
            3.11 LNPs对线粒体膜电位的影响
            3.12 LNPs对细胞周期的影响
            3.13 LNPs体内抗肿瘤活性
        4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]应用蛋白质组学技术筛选鉴定锌指蛋白139调控的胃癌转移相关蛋白质[J]. 李勇,王力利,康爱文,范立侨,赵群,檀碧波,郝英杰,刘庆伟.  南方医科大学学报. 2015(03)
[2]单因素考察及正交设计确定三氧化二砷PLGA纳米粒制备工艺[J]. 陈昦,王雪莹,张玉华,阎雪莹.  中医药信息. 2011(03)



本文编号：3627989