金枪鱼骨胶原蛋白肽螯合钙制备工艺及对MG-63细胞碱性磷酸酶分泌的影响

发布时间：2022-04-23 11:10

　　目的获得1种能够增加人成骨细胞碱性磷酸酶生成量的金枪鱼骨胶原蛋白肽螯合钙（collagen peptide from tuna bone chelated calcium, TCP-Ca）的工艺方法。方法利用正交实验优化蛋白酶酶解法制备金枪鱼骨胶原蛋白肽的工艺,利用正交实验优化金枪鱼骨胶原蛋白肽和柠檬酸钙进行螯合反应的工艺,然后利用傅里叶变换红外光谱对TCP-Ca进行定性分析,同时检测TCP-Ca对MG-63细胞碱性磷酸酶生成量的影响。结果金枪鱼骨胶原蛋白肽制备的最佳工艺为pH 9.0、酶解时间180 min、加酶量5 000 U/g、酶解温度45℃;TCP-Ca制备的最佳工艺为温度35℃、pH 7.5、肽钙质量比6∶1、时间40 min;金枪鱼骨胶原蛋白肽的氨基和羟基均参与了钙螯合反应;TCP-Ca比金枪鱼骨胶原蛋白肽更有利于增加MG-63细胞分泌碱性磷酸酶。结论本文优化了TCP-Ca的制备工艺,发现其具有增加成骨细胞分泌碱性磷酸酶的生物活性。 

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 金枪鱼骨和实验细胞
    1.2 实验试剂
    1.3 实验仪器
    1.4 方法
        1.4.1 酶解反应制备TCP
        1.4.2 MG-63细胞ALP检测
        1.4.3 酶解反应条件优化
            (1)酶解温度对ALP增长率的影响
            (2)酶解时间对ALP增长率的影响
            (3)酶解pH对ALP增长率的影响
            (4)加酶量对ALP增长率的影响
            (5)酶解反应获取TCP正交实验方法
        1.4.4 金枪鱼骨胶原蛋白肽氨基酸分析
        1.4.5 金枪鱼骨胶原蛋白肽螯合钙制备及工艺优化
            (1)肽钙质量比对螯合率的影响
            (2)pH对螯合率的影响
            (3)温度对螯合率的影响
            (4)时间对螯合率的影响
            (5)螯合反应正交实验方法
        1.4.6 傅里叶变换红外光谱分析
        1.4.7 金枪鱼骨胶原蛋白肽螯合钙对MG-63细胞的影响
    1.5 数据统计处理
2 结果与分析
    2.1 酶制剂的选择
    2.2 金枪鱼骨酶解反应单因素实验分析
    2.3 金枪鱼骨酶解反应正交实验分析
    2.4 TCP氨基酸分析
    2.5 TCP螯合钙制备单因素实验分析
    2.6 TCP螯合钙制备正交实验分析
    2.7 红外光谱表征TCP螯合钙
    2.8 TCP螯合钙对MG-63细胞ALP增长率的影响
3 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]罗非鱼皮胶原蛋白小肽螯合钙的制备、鉴定及抗氧化研究[J]. 夏光华,申铉日,酒志强.  食品科技. 2013(06)
[2]金枪鱼骨营养成分分析[J]. 贾建萍,周彦钢,林赛君,鲁健章,郑高利.  食品工业科技. 2013(10)

硕士论文
[1]金枪鱼罐头的研制及其副产物利用技术研究[D]. 胡静.海南大学 2015
[2]鲟鱼皮胶原蛋白肽的制备、纯化工艺及理化性质研究[D]. 刘培勇.武汉工业学院 2012
[3]牛骨胶原多肽螯合钙的制备及其结构表征[D]. 付文雯.华中农业大学 2010



本文编号：3647054