MicroRNA及基于microRNA的新型靶向纳米药物的抗肿瘤活性及机制研究

发布时间：2022-05-08 13:47

　　MicroRNAs（miRNAs）是一类非编码的单链RNA,它们的长度在20至25个碱基之间。miRNA通过与mRNA的3’-非编码区结合,形成局部碱基配对以抑制mRNA的翻译或使其降解。一个mi RNA可以识别多个mRNA并与之结合,一个mRNA也可以被多个不同的mi RNA所识别并与之相互作用。研究显示miRNA的异常表达与肿瘤的发生和发展有着密切的关系,在此过程中,mi RNA可发挥抑癌基因或癌基因的作用。宫颈癌在女性恶性肿瘤中是发病率和死亡率仅次于乳腺癌的恶性肿瘤。Hsa-mi R-124（miR-124）的表达在包括宫颈癌在内的许多种肿瘤中都显著降低。为探索miR-124在宫颈癌细胞中的调节作用,本研究构建了miR-124的表达载体并筛选了稳定表达miR-124的宫颈癌细胞株。研究结果显示miRNA-124的高表达显著抑制了宫颈癌细胞的生长和迁移及侵袭能力。进一步的研究发现,CUB domain containing protein 1（CDCP1）的表达在miR-124高表达的细胞中显著降低。萤荧光素酶实验结果显示Cdcp1基因是miR-124的直接下游靶点。miR-124... 

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩写词
第1章 绪论
    1.1 MicroRNA简介
        1.1.1 MicroRNA的作用机制
        1.1.2 MicroRNA在癌症治疗中的应用
    1.2 宫颈癌简介
        1.2.1 宫颈癌的分布及病理类型
        1.2.2 宫颈癌的病因及诊疗
        1.2.3 宫颈癌与MicroRNA
    1.3 肺癌简介
        1.3.1 肺癌的分布及病理类型
        1.3.2 肺癌的病因及诊疗
        1.3.3 肺癌与microRNA-34家族
    1.4 抗癌药物载体研究现状
        1.4.1 抗癌药物载体的种类
        1.4.2 纳米材料载体概述
        1.4.3 主动靶向载体概述
    1.5 本文的研究内容及意义
第2章 miR-124在宫颈癌中的功能研究
    2.1 实验材料及溶液配制
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 溶液配制
    2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 Si Ha细胞的培养
        2.3.2 pcDNA6.2-mi R-124载体构建
        2.3.3 pcDNA6.2-mi R-124重组质粒的稳定转染
        2.3.4 mi R-124转染效果检测
        2.3.5 CCK8实验检测细胞增殖
        2.3.6 Transwell实验检测细胞的转移与侵袭能力
        2.3.7 伤.愈合实验
        2.3.8 软琼脂集落形成实验
        2.3.9 裸鼠体内实验
        2.3.10 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 pcDNA6.2-mi R-124重组质粒的鉴定
        2.4.2 mi R-124在人宫颈癌细胞中的表达明显调低
        2.4.3 Si Ha/miR-124细胞中miR-124的表达检测
        2.4.4 mi R-124对宫颈癌细胞增殖能力的影响
        2.4.5 mi R-124对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响
        2.4.6 mi R-124对Si Ha细胞克隆形成的影响
        2.4.7 mi R-124对裸鼠体内肿瘤形成抑制作用
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 miR-124靶基因的鉴定
    3.1 实验材料及溶液配制
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 溶液配制
    3.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 通过数据库预测miR-124靶基因
        3.3.2 双荧光素酶报告基因载体的构建
        3.3.3 双荧光素酶报告基因实验
        3.3.4 Western Blot检测CDCP1蛋白表达水平
        3.3.5 mi R-124对CDCP1蛋白水平的影响
        3.3.6 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 mi R-124靶基因的预测
        3.4.2 Cdcp1基因在SiHa/miR-124细胞中的表达
        3.4.3 mi R-124的靶点检测
        3.4.4 恢复CDCP1表达对肿瘤抑制的影响
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第4章 AMNPs的制备与表征
    4.1 实验材料及溶液配制
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 溶液配制
    4.2 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 SPDP交联剂修饰mi R-34a
        4.3.2 MNPs的制备
        4.3.3 AMNPs的制备
        4.3.4 NPs，MNPs和AMNPs粒径、表面电位的检测
        4.3.5 MNPs与AMNPs的形态观察
        4.3.6 凝胶电泳检测Aptamer-miR-34a嵌合体的连接
        4.3.7 统计学分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 MNPs的合成结果检验
        4.4.2 AMNPs的合成结果检验
        4.4.3 NPs，MNPs和AMNPs表征
        4.4.4 MNPs与AMNPs的形态观察
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
第5章 AMPNs在肺癌细胞中的转运与作用研究
    5.1 实验材料及溶液配制
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 溶液配制
    5.2 实验仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 A549细胞的传代培养
        5.3.2 共聚焦显微镜检验AMPNs摄取能力
        5.3.3 Real-time PCR检测miR-34a的表达
        5.3.4 Western Blot检测SIRT1蛋白的表达
        5.3.5 Transwell实验检测A549细胞转移能力
        5.3.6 Annexin V-PI检测细胞凋亡
        5.3.7 统计学分析
    5.4 实验结果
        5.4.1 共聚焦显微镜观察AMPNs摄取能力
        5.4.2 mi R-34a的表达检测
        5.4.3 SIRT1蛋白的表达检测
        5.4.4 Transwell实验检测A549细胞转移能力结果
        5.4.5 Annexin V-PI检测细胞凋亡情况
    5.5 讨论
    5.6 本章小结
结论
参考文献
附录
攻读博士学位期间所发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国肺癌死亡趋势分析及发病、死亡的估计与预测[J]. 杨玲,李连弟,陈育德,Donald Maxwell Parkin.  中国肺癌杂志. 2005(04)



本文编号：3651768