毛细管高效液相色谱—质谱定量分析中毛细管电加热装置和精氨酸标记新方法的研究

发布时间：2017-05-14 22:13

  本文关键词：毛细管高效液相色谱—质谱定量分析中毛细管电加热装置和精氨酸标记新方法的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：随着蛋白质组学研究的不断深入和技术的不断发展,蛋白质组学研究的重点从蛋白质鉴定、翻译后修饰和相互作用的定性研究,向不同生理和病理状态蛋白质表达的差异变化及对关键的目标蛋白质含量测定转变,因此,定量蛋白质组学已经成为目前蛋白组学研究的热点及难点。因此,本论文首先是针对定量蛋白质组学研究中面临的问题,即对复杂生物样本进行高效分离,以实现对低丰度蛋白质进行深度定性鉴定和定量分析中采用更长的毛细管色谱柱或采用装填更小粒径填料的毛细管色谱柱时容易引起毛细管色谱柱柱压显著升高,从而引发液相色谱仪中不同连接部位漏液问题,制备了一种简单的电加热装置,并对其性能进行了评价。其次针对目前复杂生物样本中蛋白质或目标定量蛋白质组定量过程中定量方法存在的缺陷,即准确度和灵敏度不高的问题,发展了基于精氨酸化学标记新方法。本论文由三章组成。第一章首先概述了定量蛋白质组学的研究现状、高效液相色谱分离的重要性、现状及存在问题。其次概述了标记定量在蛋白质组学中的应用现状、药物代谢酶及其绝对含量测定的意义等内容。第二章介绍了一种简单的毛细管色谱柱电加热装置制作方法,并将该毛细管色谱柱电加热装置安装于液质联用系统,用牛血清蛋白酶切肽段混合物和酵母蛋白酶切肽段混合物从柱压和柱效二方面来对该装置的性能进行了评价。实验结果表明：我们制作的毛细管柱电加热装置用于装填粒径为3 μm反相色谱填料的毛细管柱后,在最佳电流(100 mA)下对牛血清蛋白酶切肽段混合物进行分离时的柱压比不加电流分离时的柱压降低了61%,覆盖率增加了20%；在该最佳电流下对酵母蛋白酶切肽段混合物进行分离时,柱压降低了50%,而柱效略有升高。这说明我们制作的毛细管色谱柱电加热装能显著降低柱压,这为在较低的柱压条件下选择更小颗粒色谱填料的毛细管色谱柱提供了一种有效途径。第三章介绍了基于点击化学的精氨酸化学标记新方法的研究。基于琥珀酰亚胺基团与肽段N-末段的反应以及施陶丁格反应的原理,将精氨酸作为标签加到肽段的N-末段,建立了精氨酸化学标记新方法。实验结果表明：精氨酸化学标记能够实现对肽段的高效的标记,满足了标记定量的要求；考察了随意选择的两种同位素的标记肽段的色谱保留行为,保留时间完全一致,使得不同来源的同一肽段可同时在质谱碰撞池碎裂和质谱分析,保证了定量结果的准确度。该方法的建立为复杂生物样本中蛋白质或目标蛋白质组的定量分析提供了一种新的方法学选择。
【关键词】：定量蛋白质组学 毛细管高效液相色谱-质谱联用 精氨酸标记 毛细管色谱柱电加热装置
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R917;O657.63
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 第一章 前言10-19
• 1 定量蛋白质组学10-11
• 2 毛细管高效液相色谱-质谱联用在蛋白质组定量方法中的色谱技术11-14
• 3 毛细管高效液相色谱-质谱联用在蛋白组定量方法中的化学标记方法14-17
• 4 药物代谢酶及其绝对含量测定的意义17-18
• 5 本论文研究内容18-19
• 第二章 一种简单的毛细管色谱柱电加热装置的制作方法及其性能评价19-36
• 1 实验部分19-23
• 2 结果与讨论23-35
• 3 结论35-36
• 第三章 基于点击化学的精氨酸标记新方法研究36-57
• 1 实验部分36-40
• 2 结果讨论40-56
• 3 结论56-57
• 参考文献57-64
• 附录64-65
• 致谢65-66
• 综述66-76
• 参考文献73-76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 周愿;单亦初;张丽华;张玉奎;;基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展[J];色谱;2013年06期

2 成洪达;李彤;张维冰;;温度对高效液相色谱分离性能的影响[J];现代科学仪器;2006年05期

3 王宇光,高月,柴彪新,陈鹏,谭洪玲,赵永红,肖成荣,孙圆媛,朱力军;人参、藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用[J];中国中药杂志;2004年04期

  本文关键词：毛细管高效液相色谱—质谱定量分析中毛细管电加热装置和精氨酸标记新方法的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：366370