血小板氧化破碎机制分子靶点的筛选及鉴定

发布时间：2017-05-15 02:00

  本文关键词：血小板氧化破碎机制分子靶点的筛选及鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：艾滋病病毒／丙型肝炎病毒免疫相关性血小板减少症病人(HIV-1/HCV-ITP)的血液中存在一种特殊的抗血小板自身抗体,它与血小板整合素GPIIIa49-66表位结合后,可激活血小板内NADPH氧化酶,产生反应性氧自由基(ROS),启动补体-非依赖性血小板氧化破碎这一血小板死亡途径,但是不同病人血液中的这种自身抗体对于血小板的氧化破碎效果并不相同,GPIIIa49-66序列由三个表位组成,分别为GPⅢa49-57 (CAPESIEFP), GPⅢa57-64 (PVSEARVL),和GPIIIa59-66 (SEARVLED),具体是哪个表位对于血小板的氧化破碎起关键性的调节作用目前尚不清楚。针对这一问题,在本研究中,我们通过杂交瘤技术经过动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选及鉴定、单克隆抗体的纯化等步骤制备出一系列针对于GPⅢa49-66三个不同表位的鼠源性单克隆抗体,并且所有抗体均可与人血小板结合,在这些抗体中IE7和5A10可与表位GPⅢa49-57 (CAPESIEFP,命名为P1)结合,1C1和1E5可与表位GPⅢa57-64 (PVSEARVL,命名为P2)结合,4D5和5F8可与表位GPⅢa59-66 (SEARVLED,命名为P3)结合,这些抗体分别与人血小板进行孵育,结果显示,针对于P1表位的单克隆抗体对血小板的氧化破碎效果高于对照组5-6倍。然而,针对于P2和P3表位的单克隆抗体对血小板的氧化破碎效果仅高于对照组低于2倍。因此,该结果提示,血小板表面整合素GPⅢa49-57 (CAPESIEFP)表位可能对于血小板氧化破碎起关键性调节作用,这一具体的分子靶向研究结果对于临床上如何溶解已经形成的动脉血栓团块将具有一定的借鉴意义。
【关键词】：免疫学 血小板减少症 GPⅢa49-66 血小板氧化破碎 单克隆抗体
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略词10-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 实验材料及方法15-31
• 2.1 实验仪器及设备15-22
• 2.1.1 实验仪器15-17
• 2.1.2 实验耗材17-18
• 2.1.3 实验试剂18-21
• 2.1.4 实验动物及细胞来源21-22
• 2.2 实验方法22-31
• 2.2.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位单克隆抗体的制备22-28
• 2.2.2 HUVEC细胞培养28
• 2.2.3 考马斯亮蓝染色28
• 2.2.4 Western blotting筛选阳性克隆28-29
• 2.2.5 ELISA分析抗体效价29-30
• 2.2.6 流式细胞仪工作原理30
• 2.2.7 流式细胞仪检测单克隆抗体与血小板结合性30-31
• 2.2.8 流式细胞仪检测单克隆抗体对血小板氧化破碎效果31
• 第三章 实验结果31-41
• 3.1 血小板整合素GPⅢa49-66不同表位单克隆抗体的产生31-33
• 3.2 不同的单克隆抗体可以与GPⅢa49-66不同区域结合33-34
• 3.3 纯化后的单克隆抗体与人血小板的结合性34-37
• 3.4 不同抗体对人血小板氧化破碎效果37-39
• 3.5 不同抗体对小鼠血小板氧化破碎效果39-41
• 第四章 讨论41-43
• 第五章 附录43-46
• 5.1 常用实验试剂的配制43-45
• 5.2 本人文章发表45-46
• 附件46-48
• 参考文献48-54
• 致谢54-55

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