西藏湖泊抗生素产生菌的分离及鉴定

发布时间：2022-10-18 19:49

　　湖泊环境中蕴含着丰富的放线菌资源,是发现抗生素先导化合物的天然宝库。本论文建立了一套整体研究方案用于西藏湖泊放线菌来源抗菌次级代谢产物的挖掘,取得如下研究结果:从22个湖泊沉积物样品中分离获得分属19个属、90个种的放线菌纯培养物158株,其中优势菌属为链霉菌属。不同湖泊沉积物样品中可培养放线菌的种类和数量存在明显差异,其中芦布措湖沉积物样品中可培养放线菌种类最多。菌株经16S rDNA测序和系统进化树构建,初步鉴定可能为放线菌新种的菌株6株。通过考察秀丽隐杆线虫液体培养基、致病菌感染时长、致病菌接种浓度、救治时间等因素,构建了金黄色葡萄球菌感染线虫体内筛选模型和铜绿假单胞菌感染线虫体内筛选模型。其中金黄色葡萄球菌感染线虫模型采用20%BHI-M9液体培养基,感染时长为10 h,感染菌浓度5×10~7 CFU/mL,救治时间为24 h;铜绿假单胞菌感染线虫模型采用20%BHI-M9液体培养基,感染时长为8 h,感染菌浓度5×10~6 CFU/mL,救治时间为24h。对158株放线菌发酵产物的乙酸乙酯萃取粗品,采用5种检定菌和琼脂扩散法进行体外抗菌活性测定,发现64株菌株的发酵产物具有针... 

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
1 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 湖泊细菌及放线菌的多样性
    1.3 西藏湖泊及西藏地区微生物概况
    1.4 放线菌活性菌株的筛选
        1.4.1 根据理化性质筛选
        1.4.2 根据抗菌活性筛选
    1.5 放线菌的多相分类研究
    1.6 本研究的立项依据、目的及意义
        1.6.1 立项依据
        1.6.2 研究目的和意义
    1.7 技术路线及研究内容
        1.7.1 技术路线
        1.7.2 研究内容
2 西藏湖泊沉积物中放线菌的分离
    2.1 试验材料
        2.1.1 西藏湖泊沉积物样品采集
        2.1.2 培养基
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 放线菌的分离及保藏
        2.2.2 菌株排重指标
        2.2.3 16S rDNA序列测定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 菌株分离
        2.3.2 菌株16S rDNA序列鉴定结果
    2.4 小结与讨论
3 秀丽隐杆线虫感染模型的构建
    3.1 试验材料
        3.1.1 致病菌
        3.1.2 线虫
        3.1.3 培养基
        3.1.4 主要溶液
        3.1.5 主要试剂
        3.1.6 主要仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 E.coli OP50 的保存及培养
        3.2.2 秀丽隐杆线虫的同期化
        3.2.3 秀丽隐杆线虫的保存及传代
        3.2.4 致病菌的复苏和菌悬液的配置
        3.2.5 秀丽隐杆线虫-金黄色葡萄球菌模型的构建
        3.2.6 秀丽隐杆线虫-铜绿假单胞菌模型的构建
        3.2.7 结果分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 秀丽隐杆线虫-金黄色葡萄球菌模型的影响因素考察
        3.3.2 优化后的秀丽隐杆线虫-金黄色葡萄球菌模型
        3.3.3 秀丽隐杆线虫-铜绿假单胞菌模型的影响因素考察
        3.3.4 优化后的秀丽隐杆线虫-铜绿假单胞菌模型
    3.4 小结与讨论
4 湖泊放线菌发酵提取液的体内外抗菌活性筛选
    4.1 试验材料
        4.1.1 致病菌
        4.1.2 线虫
        4.1.3 供试菌株
        4.1.4 培养基
        4.1.5 主要溶液及试剂
        4.1.6 主要仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 菌株的发酵培养及供筛样品制备
        4.2.2 体外抗细菌活性检测
        4.2.3 体外抗真菌活性检测
        4.2.4 体内抗菌活性筛选
        4.2.5 样品的HPLC分析
        4.2.6 体内活性样品的HPLC分离馏分制备
        4.2.7 化合物分离纯化
        4.2.8 化合物的波谱测定
    4.3 结果与分析
        4.3.1 体外抗菌活性检测
        4.3.2 体内抗菌活性筛选
        4.3.3 活性菌株发酵产物的HPLC分析
        4.3.4 化合物PF160-C1 的结构确证
    4.4 小结与讨论
5 活性菌株PF160 的多相分类
    5.1 试验材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 培养基
        5.1.3 主要溶液及试剂
        5.1.4 主要仪器
    5.2 试验方法
        5.2.1 培养特征及显微形态
        5.2.2 系统发育分析
        5.2.3 菌株PF160 的全基因组的测序
        5.2.4 生理生化特征
        5.2.5 化学组分分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 培养特征及显微形态
        5.3.2 系统发育分析
        5.3.3 菌株PF160 的全基因组序列分析
        5.3.4 生理生化特征
        5.3.5 化学组分分析
    5.4 小结与讨论
结论
参考文献
附录A TIANGEN细菌基因组DNA提取试剂盒
附图
攻读硕士学位期间发表论文及科研成果
致谢
声明
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]西藏低温放线菌的多样性及其生物活性[J]. 尹明远,何建清,张格杰.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2017(06)
[2]西南地区高山湖泊中可培养细菌多样性及其所产胞外活性物质的特性[J]. 张姜,黄嘉丰,李艳玲,刘丹,吴日帮,廖斌强,雷鸣,肖潇,武翠玲,何海伦.  微生物学通报. 2017(09)
[3]新疆艾比湖沉积物中免培养放线菌的多样性[J]. 吕杰,吕光辉,马媛.  微生物学报. 2016(09)
[4]我国放线菌系统学研究历史、现状及未来发展趋势[J]. 李文均,职晓阳,唐蜀昆.  微生物学通报. 2013(10)
[5]秀丽隐杆线虫作为抗感染药物筛选模型的研究进展[J]. 史秋佳,杨剑萍,陈缵光.  中国药理学通报. 2013(10)
[6]海洋放线菌Streptomyces variabilis strain 6-1次级代谢产物的研究[J]. 赵韵宇,孙伟,彭崇胜,李志勇.  现代生物医学进展. 2012(26)
[7]艾丁湖沉积物放线菌多样性[J]. 夏占峰,关统伟,阮继生,黄英,张利莉.  微生物学报. 2011(08)
[8]活性氧在细菌耐抗生素机制中的作用[J]. 张亚妮,段康民.  中国药理学通报. 2010(09)
[9]用秀丽隐杆线虫观察43种中药的体内抗菌药效[J]. 杨再昌,马小彦,乐意,牛玉乐,乔冲.  时珍国医国药. 2010(05)
[10]一株耐碱链霉菌次生代谢产物的研究[J]. 郑丹,姜怡,娄恺,陈云,徐丽华,韩力.  中国药物化学杂志. 2009(05)

博士论文
[1]云南高原程海湖沉积物中的细菌多样性研究[D]. 王永霞.云南大学 2014

硕士论文
[1]活体高通量筛选抑制斑马鱼巨噬细胞迁移的中药[D]. 秦帅.贵阳中医学院 2011
[2]西藏地区土壤放线菌种群多样性及戈登氏菌的多相分类研究[D]. 罗红丽.西南大学 2006



本文编号：3692944