抗菌肽CGA-N12对热带念珠菌线粒体通透性转换孔作用机理研究

发布时间：2022-10-29 12:31

　　抗菌肽CGA-N12是源于人嗜铬粒蛋白A的N-末端（CGA 65-76）衍生肽,具有特异抗念珠菌活性,对哺乳动物细胞无毒性。前期研究发现,CGA-N12诱导线粒体膜电位耗散,但其降低线粒体膜电位的机制尚不清楚。线粒体膜通透性转换孔（mPTP）是线粒体活性调节中枢,研究CGA-N12对mPTP的作用,旨在揭示CGA-N12降低线粒体膜电位作用机理。透射电镜和光谱学研究结果显示,CGA-N12改变线粒体超微结构,诱导基质肿胀,证明线粒体膜通透性增加;1500Da以下的物质自由进出线粒体,促进细胞色素c（Cyt c）和Ca²⁺释放,说明CGA-N12使mPTP不可逆开放;质子梯度消失,膜电位耗散,从而引起线粒体ATPase水解活性增加,加重mPTP的开放。结果表明,CGA-N12通过打开mPTP,降低热带念珠菌线粒体膜电位。利用不同作用机制的mPTP打开抑制剂环孢菌素A（CsA）、米酵菌素（BA）、溴二胺（MBM⁺）和二硫苏糖醇（DTT）,研究CGA-N12在mPTP蛋白质复合物上的作用位点。光谱学结果表明,BA和MBM⁺完全... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 念珠菌病
    1.2 抗真菌药物及病原真菌耐药机制
        1.2.1 抗真菌药物作用靶点
        1.2.2 病原真菌耐药机制
    1.3 抗菌肽
        1.3.1 抗菌肽理化性质
        1.3.2 抗菌肽结构特征
        1.3.3 抗菌肽作用机制
    1.4 抗菌肽对线粒体的作用
        1.4.1 抗菌肽对线粒体膜电位的影响
        1.4.2 抗菌肽对线粒体Ca2+稳态的影响
        1.4.3 抗菌肽对细胞色素c泄露的影响
        1.4.4 抗菌肽对线粒体能量代谢的影响
    1.5 线粒体通透性转换孔研究进展
        1.5.1 线粒体通透性转换孔结构与功能
        1.5.2 线粒体通透性转换孔开放的影响
        1.5.3 线粒体通透性转换孔的调控
    1.6 CGA-N12的来源
    1.7 研究目的和内容
        1.7.1 研究目的
        1.7.2 研究内容
第二章 抗菌肽CGA-N12对热带念珠菌线粒体膜通透性转换孔的作用
    2.1 实验材料
        2.1.1 抗菌肽CGA-N12的制备
        2.1.2 菌种
        2.1.3 试剂
        2.1.4 仪器设备
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 线粒体提取
        2.2.2 线粒体膜电位检测
        2.2.3 线粒体超微结构观察
        2.2.4 线粒体肿胀检测
        2.2.5 线粒体溶质尺寸排除法
        2.2.6 线粒体Cytc泄露检测
        2.2.7 线粒体Ca~(2+)水平检测
        2.2.8 ATPase水解活性检测
        2.2.9 CGA-N12对m PTP蛋白质复合物功能的影响
    2.3 实验结果
        2.3.1 线粒体膜电位耗散
        2.3.2 线粒体超微结构变化
        2.3.3 线粒体肿胀
        2.3.4 热带念珠菌mPTP的溶质尺寸排阻特性
        2.3.5 PEG1000诱导线粒体收缩
        2.3.6 线粒体细胞色素c泄露
        2.3.7 线粒体Ca~(2+)泄露
        2.3.8 ATPase水解活性增加
        2.3.9 CGA-N12对m PTP蛋白质复合物的作用
    2.4 章节总结
第三章 念珠菌mPTP与动物细胞mPTP蛋白组分基因扩增比较
    3.1 实验材料
        3.1.1抗菌肽CGA-N12
        3.1.2 菌种
        3.1.3 细胞
        3.1.4 试剂
        3.1.5 仪器设备
        3.1.6 主要溶液配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 热带念珠菌基因组DNA提取
        3.2.2 人正常肝细胞株L02的基因组DNA提取
        3.2.3 mPTP不同亚基引物设计
        3.2.4 PCR扩增
        3.2.5 凝胶电泳实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 BAX蛋白基因扩增比较
        3.3.2 Bcl-2蛋白基因扩增比较
        3.3.3 CyPD蛋白基因扩增比较
        3.3.4 VDAC蛋白基因扩增比较
        3.3.5 ANT蛋白基因扩增比较
    3.4 章节总结
第四章 讨论
结论
    5.1 CGA-N12对热带念珠菌线粒体通透性转换孔的作用机理
    5.2 热带念珠菌与哺乳动物细胞mPTP 蛋白组分基因扩增比较
参考文献
附录
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]抗菌肽的生物学特征与作用机制间的相关性[J]. 张宇,姜宁,张爱忠,张晨雪.  中国生物制品学杂志. 2019(07)
[2]嗜铬粒蛋白N区抗真菌活性片段研究[J]. 李瑞芳,张添元,罗进贤,王芳宇,顾取良,甘菁菁,肖凡.  中山大学学报(自然科学版). 2006(02)

硕士论文
[1]热带念珠菌KRE9的重组表达及其与抗菌肽CGA-N12相互作用研究[D]. 刘政伟.河南工业大学 2018



本文编号：3697690