氯喹差异性调节金葡菌激活的RAW 264.7巨噬细胞炎症因子的表达

发布时间：2017-05-16 09:19

  本文关键词：氯喹差异性调节金葡菌激活的RAW 264.7巨噬细胞炎症因子的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：氯喹(Chloroquine,CQ)是治疗疟疾症状发作时最有效的药物,其已有60多年的临床应用历史。CQ还能用于治疗一些自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、红斑狼疮等,作用机制可能与其抑制单核/巨噬细胞释放促炎细胞因子如TNF-α、IL-6等有关。本课题通过分析CQ对灭活金黄色葡萄球菌(inactivated Staphylococcus aureus cells,SAC)刺激活化的RAW 264.7巨噬细胞表达炎症因子的影响,探讨其对革兰氏阳性菌引起的炎症反应的潜在作用及机制。方法:1.采用细胞内细胞因子染色法(ICS)分析RAW 264.7巨噬细胞胞内TNF-α、IL-6、CCL2的表达,利用流式微球阵列法(CBA)检测RAW 264.7细胞培养上清中TNF-α、IL-6、CCL2的表达。2.利用实时定量RT-PCR法分析RAW 264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6、CCL2的m RNA表达水平;免疫印迹法检测TNF-α前体的表达,以及CQ对有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)、NF-kB等通路相关蛋白磷酸化水平的影响。结果:1.CQ明显抑制SAC激活的RAW 264.7巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-6、CCL2的表达,而细胞内TNF-α和CCL2的表达水平提高。2.定量RT-PCR法显示CQ减少SAC激活的RAW 264.7巨噬细胞IL-6m RNA的表达,增加CCL2的m RNA表达水平,然而对TNF-α的m RNA水平没有影响;免疫印迹分析表明,CQ对SAC激活的MAPKs、NF-kB炎症相关信号通路的蛋白磷酸化水平影响不大,然而,CQ使SAC诱导的26 k Da和28 k Da TNF-α前体蛋白的表达水平显著升高。结论:1.CQ通过抑制TNF-α从膜结合的26 k Da和28 k Da前体蛋白转变为可溶性成熟蛋白的加工过程而抑制该炎症细胞因子的分泌。2.CQ能差异性调节金黄色葡萄球菌激活的RAW 264.7巨噬细胞炎症因子的表达,发挥其抗炎效应。
【关键词】：氯喹 IL-6 巨噬细胞 金黄色葡萄球菌 肿瘤坏死因子
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 一、前言9-15
• 1.1 氯喹的研发10
• 1.2 氯喹的物理化学性质10-11
• 1.3 氯喹的临床应用11
• 1.4 有关氯喹抗炎的作用机制11-12
• 1.5 炎症相关信号通路12-13
• 1.6 本课题的研究目的和意义13-15
• 二、实验材料和方法15-23
• 2.1 实验材料15-20
• 2.1.1 实验细胞株15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.3 主要仪器16
• 2.1.4 主要溶液配方16-20
• 2.2 实验方法20-23
• 2.2.1 RAW 264.7 细胞培养20
• 2.2.2 细胞内细胞因子染色20
• 2.2.3 CBA检测培养液上清中细胞因子20
• 2.2.4 实时定量PCR20-21
• 2.2.5 免疫印迹分析21
• 2.2.6 免疫荧光染色21-22
• 2.2.7 统计学分析22-23
• 三、 实验结果23-33
• 3.1 氯喹(CQ)上调SAC激活的RAW 264.7 巨噬细胞胞内促炎细胞因子的表达,然而却抑制促炎细胞因子在培养上清中的分泌23-25
• 3.2 CQ差异性调节SAC激活的RAW 264.7 巨噬细胞促炎细胞因子m RNA的水平25-27
• 3.3 CQ对SAC激活的RAW 264.7 细胞MAPK, NF-κB和p70S6K信号通路无明显影响27-31
• 3.4 CQ对SAC激活的RAW 264.7 细胞TNF-α 加工成熟的影响31-33
• 四、讨论33-36
• 参考文献36-42
• 五、全文总结42-43
• 附录I 英文缩略词43-44
• 附录II 在校期间发表文章及成果44-45
• 致谢45-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：370448