去甲肾上腺素α2受体抑制炎性疼痛动物脊髓背角ERK1/2活性的分子机制

发布时间：2022-12-11 16:03

　　激活脊髓背角去甲肾上腺素α2受体,可以有效缓解病理性疼痛症状,但其分子机制尚不明确。细胞外信号调节激酶1/2（Extracellular signal-regulated kinases1and2; ERK1/2）的活性与痛觉感受密切相关,ERK1/2的活性升高被认为是脊髓敏感化的重要标志。本研究通过小鼠足底皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）制造慢性炎性疼痛模型,使用蛋白免疫印迹、免疫组织化学、免疫共沉淀和行为学测试等方法,探讨了去甲肾上腺素α2受体对组织损伤诱发的ERK1/2信号通路的调节作用。实验结果显示：（1）鞘内给予去甲肾上腺素α2受体激动剂可乐定（0.05μg）,能够选择性降低炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2的活性,而对正常动物ERK1/2无明显影响；（2）抑制性Gi蛋白阻断剂百日咳毒素（PTX）,能够阻断可乐定对炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2的调节作用；（3）正常小鼠鞘内注射cAMP依赖性蛋白激酶（cAMP-dependent protein kinase A; PKA）激动剂forskolin（6μg）,也能模拟组织损伤、激活脊髓背角ERK1/2,且这一作用可被可乐定逆转,... 

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 去甲肾上腺素α2受体在脊髓痛觉信号传导中的作用
    1.2 ERK1/2通路在脊髓痛觉信号传导中的作用
    1.3 STEP在细胞信号转导中的作用
第二章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 缓冲溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 行为学测试
        2.2.2 药物的鞘内注射
        2.2.3 质粒的小量抽提
        2.2.4 全细胞组织匀浆的制备
        2.2.5 免疫共沉淀样品制备(Co-Immunoprecipitation；CO-IP)
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 免疫组织化学检测(Immunohistochemistry)
        2.2.8 数据分析与统计
第三章 实验结果
    3.1 可乐定在缓解炎性疼痛的同时降低脊髓背角ERK1/2活性
        3.1.1 鞘内给予可乐定缓解炎性疼痛动物机械性痛觉超敏
        3.1.2 鞘内给予可乐定降低CFA致炎动物脊髓背角ERK1/2的活性
        3.1.3 鞘内给予可乐定对正常小鼠脊髓背角ERK1/2磷酸化水平无影响
        3.1.4 ERK1/2活性的变化在可乐定抑制炎性疼痛中的作用
    3.2 可乐定通过Gαi/PKA信号通路降低炎性疼痛动物脊髓背角ERK1/2的活性
        3.2.1 Gi蛋白在可乐定降低ERK1/2活性中的作用
        3.2.2 可乐定对PKA诱发的ERK1/2磷酸化的影响
    3.3 可乐定对PKA诱发的STEP61-S221磷酸化的影响
        3.3.1 可乐定能够逆转PKA激活导致的STEP61-S221磷酸化水平升高
    3.4 STEP61在可乐定降低炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2活性中的作用
        3.4.1 可乐定调节炎性疼痛动物脊髓STEP61的磷酸化
        3.4.2 STEP61参与可乐定对炎性疼痛动物脊髓背角ERK1/2活性的调节
    3.5 脊髓STEP61在炎性疼痛中的作用
        3.5.1 过表达STEP61(S221A)可有效缓解CFA引发的炎性痛觉超敏
        3.5.2 过表达STEP61(S221A)降低炎性疼痛动物脊髓背角ERK1/2的活性
    3.6 脊髓过表达STEP61(S221A)可以缓解多种因素介导的痛觉超敏
        3.6.1 过表达STEP61(S221A)阻断PKA引发的痛觉超敏
        3.6.2 过表达STEP61(S221A)缓解NMDA受体引发的痛觉超敏
第四章 讨论
    4.1 ERK1/2是去甲肾上腺素α2受体镇痛作用的重要靶点
    4.2 Gαi/PKA通路参与可乐定对炎性疼痛动物脊髓背角ERK1/2活性的调节
    4.3 STEP61参与可乐定对ERK1/2活性的调节
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
缩略词
参考文献
在学期间研究成果
致谢



本文编号：3719080