抑食金球藻（秦皇岛株）细胞毒性及溶血活性研究

发布时间：2023-01-26 07:59

　　2009年,我国河北省秦皇岛沿岸海域首次暴发褐潮,且之后连续多年均有不同规模的褐潮暴发。褐潮的发生严重影响了当地的海洋生态系统并对海洋资源和贝类养殖业构成威胁。虽然褐潮对海洋生物的影响人们已经有了系统的认知,但褐潮藻（抑食金球藻）对海洋生物的致害机制到目前为止人们还尚无定论。褐潮藻是否产生毒素、毒素的理化性质和作用机制如何都还需要进一步探索。本论文以PC12神经细胞为研究对象,使用抑食金球藻细胞提取物进行褐潮藻毒性效应的研究。首先从细胞增殖、胞外乳酸脱氢酶渗漏、细胞形态学变化及细胞凋亡/坏死等方面探讨抑食金球藻的细胞毒性效应。根据抑食金球藻细胞毒性效应的实验结果,提出抑食金球藻细胞毒性可能是由溶血活性而导致的假设。基于此,运用光学显微镜和AFM原子力显微镜观察抑食金球藻细胞提取物对兔血红细胞的溶血现象;采用薄层色谱法对抑食金球藻溶血毒素进行初步的分离鉴定;研究多种理化因子（温度、pH、氧化剂和还原剂及二价金属离子）对抑食金球藻溶血活性的影响;以渗透保护实验及磷脂酶活性检测分析抑食金球藻溶血毒素的溶血方式,为抑食金球藻毒性效应的深入研究奠定基础,也为分析褐潮藻的危害机制提供了新的思路。本... 

【文章页数】：111 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 褐潮及其原因藻
    1.2 国内外褐潮暴发现状及经济损失
    1.3 褐潮对海洋生物的危害及其机制
    1.4 基于细胞毒性的赤潮毒素检测方法
    1.5 赤潮毒素的细胞毒性作用
    1.6 溶血毒素
    1.7 本论文研究的目的及意义
2 抑食金球藻细胞提取物对PC12神经细胞毒性效应
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 抑食金球藻的生长曲线
        2.3.2 抑食金球藻细胞提取物的有机萃取
        2.3.3 抑食金球藻提取物对细胞增殖的影响及IC_(50)计算
        2.3.4 抑食金球藻提取物对细胞形态学的影响
        2.3.5 抑食金球藻提取物对PC12细胞胞外LDH含量的影响
        2.3.6 抑食金球藻提取物对PC12细胞凋亡率和坏死率的影响
    2.4 讨论
3 抑食金球藻溶血活性的测定及溶血毒素的初步分离
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 抑食金球藻溶血活性观察
        3.3.2 溶血毒素溶血过程的原子力显微观察
        3.3.3 溶血标准曲线
        3.3.4 抑食金球藻溶血毒素初步分离与分析
    3.4 讨论
4 抑食金球藻溶血活性观察及理化特性的研究
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 不同反应温度对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
        4.3.2 不同pH值对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
        4.3.3 二价金属离子对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
        4.3.4 Hg~(2+)对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
        4.3.5 氧化剂和还原剂对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
    4.4 讨论
5 抑食金球藻溶血素对血红细胞的作用研究
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 不同动物血红细胞对抑食金球藻溶血毒素的敏感性
        5.3.2 不同糖类及脂质对抑食金球藻溶血毒素溶血活性的影响
        5.3.3 渗透保护实验
        5.3.4 磷脂酶活性
    5.4 讨论
6 结论与展望
参考文献
在校期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]褐潮藻Aureococcus anophagefferens的危害研究进展[J]. 公晗,颜天,周名江.  海洋科学. 2014(06)
[2]抑食金球藻对卤虫和鼠的急性毒性及对兔皮肤和眼的刺激作用[J]. 吴霓,徐晓娇,江天久,江涛,吕颂辉.  水产学报. 2014(03)
[3]2011年烟台四十里湾微微型金藻褐潮分析[J]. 刘爱英,宋秀凯,秦华伟,刘丽娟,刘晓静,任利华,白艳艳,靳洋.  海洋湖沼通报. 2013(03)
[4]对桑沟湾海域一次藻华事件原因种的初步分析[J]. 孔凡洲,于仁成,张清春,王云峰,颜天,周名江.  海洋环境科学. 2012(06)
[5]Pigment characterization for the 2011 bloom in Qinhuangdao implicated "brown tide" events in China[J]. 孔凡洲,于仁成,张清春,颜天,周名江.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2012(03)
[6]海洋微藻溶血毒素研究进展[J]. 江涛,滕德强,江天久,吕颂辉,杨维东.  热带亚热带植物学报. 2012(03)
[7]卵圆卡盾藻溶血毒素产毒的影响因素研究[J]. 江涛,吴霓,钟艳,江天久.  安全与环境学报. 2012(02)
[8]海洋卡盾藻(香港株)溶血活性特征研究[J]. 江涛,王锐,吴霓,江天久.  环境科学. 2011(10)
[9]Toxic effects of Karenia mikimotoi extracts on mammalian cells[J]. 陈洋,颜天,于仁成,周名江.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2011(04)
[10]不同膜脂对米氏凯伦藻溶血毒素致溶血作用的影响[J]. 史战鹏,刘洁生,李宏业,崔伟民,杨维东.  卫生研究. 2011(03)

博士论文
[1]哈维氏弧菌VHH溶血素作用机理的研究[D]. 孙铂光.中国海洋大学 2009
[2]水母刺丝囊毒素的提取、溶血活性和毒性的研究[D]. 冯金华.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
[3]DSP等赤潮藻毒素对哺乳类细胞的毒性效应及机制研究[D]. 陈洋.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2008
[4]球形棕囊藻溶血毒素及其生物合成机制的研究[D]. 彭喜春.华南理工大学 2005

硕士论文
[1]米氏凯伦藻溶血毒素的生成及溶血特性研究[D]. 崔伟民.暨南大学 2009
[2]集胞藻Synechocystis sp. PCC 6803溶血素的理化特性及溶血机制的研究[D]. 赵媛媛.中国海洋大学 2007



本文编号：3732332