基于BiFC技术验证IMM-H004对CKLF1/CCR4结合的影响

发布时间：2023-03-04 01:27

　　目的利用BiFC双分子荧光互补技术研究香豆素衍生物IMM-H004对趋化素样因子CKLF1与其受体CCR4结合的影响。方法引入BiFC技术,将CKLF1趋化活性肽段C27与CCR4分别与Venus荧光蛋白的N端(VN173)和C端(VC155)相连,C27与CCR4的结合可以Venus黄色荧光的形式体现,重组载体共转染HEK293细胞,进行氧糖剥夺/复氧损伤造模,并给予0.1、1和10μmol·L^-1 IMM-H004,观察活细胞中荧光强度。结果通过测序比对验证CKLF1/CCR4-BiFC系统构建成功,并能转染HEK293细胞正常启动,在该系统中,与Control组相比,OGD/R造模后黄色荧光强度明显增加(P<0.01),给予不同浓度IMM-H004后荧光表达均明显降低(P<0.01),差异具有统计学意义。结论通过BiFC技术,在活细胞状态下直观观察到IMM-H004在脑缺血损伤模型中具有明显的神经保护作用,可拮抗氧糖剥夺/复氧损伤造模状态下CKLF1/CCR4的结合。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞
    1.2 药品与试剂
    1.3 主要仪器
    1.4 细胞培养
    1.5 氧糖剥夺/复氧模型(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)建立
    1.6 CKLF1-BiFC载体构建
        1.6.1 引物设计
    1.7 瞬时转染
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 CKLF1/CCR4 BiFC系统构建
    2.2 CKLF1/CCR4-BiFC系统验证
    2.3 CKLF1/CCR4 BiFC系统在OGD/R造模情况下验证
    2.4 基于CKLF1/CCR4 BiFC系统检测IMM-H004对OGD/R造模后荧光强度的影响
3 讨论



本文编号：3753472