特境微生物天然产物体外神经保护活性筛选及其作用机制研究

发布时间：2023-03-21 20:10

　　新生儿缺氧缺血性脑病(neonatal hypoxie-ischemic encephalopathy,NHIE)是指在围产期窒息而导致脑的缺氧缺血性损伤,NHIE不仅严重威胁着新生儿的生命,更是新生儿期后病残儿中最常见的病因之一。NHIE会导致人类新生儿死亡和慢性神经功能障碍,星形胶质细胞参与构成血脑屏障,是遭受缺血危险后第一个受损害的脑细胞,保护受损星形胶质细胞成为治疗NHIE的有效策略。因此,基于NHIE的发生机制,寻找疗效可靠的神经保护药物,对治疗新生儿缺氧缺血性脑病具有重要的现实意义。近年来,从陆生植物和环境微生物中发现新化合物的几率越来越小,因此,越来越多的科研人员开始关注特殊生境微生物,尤其植物内生菌和海洋微生物。特境微生物更容易产生具有丰富的结构多样性和生物活性多样性的次生代谢产物,能够为新药研制提供丰富的先导化合物。糖氧剥夺(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)细胞模型常被用来模拟NHIE进行药物研究,因此,本学位论文建立大鼠原代星形胶质细胞OGD模型体外模拟NHIE。实验发现,缺氧缺糖6h时模型细胞的凋亡率已超过50%,因此,无糖培养基缺氧...

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摘要
Abstract
缩略词表
第一章 SIRT1对神经系统损伤的保护作用
    1.1 SIRTI蛋白
    1.2 SIRT1的小分子调节剂
        1.2.1 SIRT1激活剂
        1.2.2 SIRT1抑制剂
    1.3 SIRT1在脑损伤中的作用
        1.3.1 SIRT1与神经退行性疾病
            1.3.1.1 阿尔茨海默病与SRT1
            1.3.1.2 帕金森病与SRT1
            1.3.1.3 亨廷顿舞蹈病与SRT1
        1.3.2 SIRT1在急性脑损伤中的作用
            1.3.2.1 缺血性脑卒中与SRT1
            1.3.2.2 创伤性脑损伤与SRT1
            1.3.2.3 蛛网膜下腔出血后早期脑损伤与SIRT1
    1.4 展望
    参考文献
第二章 特境微生物天然产物对OGD模型大鼠星形胶质细胞保护活性筛选
    2.1 仪器与材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 药品与试剂
        2.1.4 待筛选天然药物
    2.2 实验方法
        2.2.1 化合物和溶液的配制
        2.2.2 星形胶质细胞的培养
        2.2.3 OGD模型的建立和实验分组
        2.2.4 免疫荧光试验鉴定星形胶质细胞
        2.2.5 化合物对正常大鼠星形胶质细胞的毒性测定
        2.2.6 化合物对OGD模型大鼠星形胶质细胞的保护活性测定
        2.2.7 数据统计分析方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 星形胶质细胞的鉴定
        2.3.2 化合物对正常星形胶质细胞的毒性
        2.3.3 化合物对OGD模型星形胶质细胞的神经保护活性
    2.4 结论与讨论
    参考文献
第三章 活性化合物对OGD模型大鼠星形胶质细胞保护作用机制研究
    3.1 仪器与材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 药品与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 溶液的配制
        3.2.2 星形胶质细胞培养
        3.2.3 OGD模型的建立和实验分组
        3.2.4 神经元-星形胶质细胞的共培养
        3.2.5 细胞上清液中LDH的测定
        3.2.6 细胞内SOD水平的测定
        3.2.7 细胞内ROS水平分析
        3.2.8 流式细胞术分析细胞凋亡率
        3.2.9 Western Blot法测定蛋白表达水平
        3.2.10 免疫荧光试验观察SIRT1和NF-κB的定位
        3.2.11 RT-PCR测定NF-κB和Bax的mRNA表达
        3.2.12 数据统计分析方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞的神经保护作用机制研究
            3.3.1.1 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞LDH、SOD和ROS水平的影响
            3.3.1.2 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞GFAP mRNA表达的影响
            3.3.1.3 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞SIRT1、Hif-1α和Ac-p53蛋白表达的影响
            3.3.1.4 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞NF-κB蛋白表达的影响
            3.3.1.5 化合物chaetoglobosin F对OGD模型细胞凋亡的影响
            3.3.1.6 化合物chaetoglobosin F预处理对共培养神经元神经突生长的影响
        3.3.2 化合物guxi-2对OGD模型细胞的神经保护作用机制研究
            3.3.2.1 化合物guxi-2对OGD模型细胞LDH、SOD和ROS水平的影响
            3.3.2.2 化合物guxi-2对OGD模型细胞GFAP mRNA的影响
            3.3.2.3 化合物guxi-2对OGD模型细胞SIRT1、Hif-1α和Ac-p53蛋白表达的影响
            3.3.2.4 化合物guxi-2对OGD模型细胞NF-κB mRNA和蛋白表达的影响
            3.3.2.5 化合物guxi-2对OGD模型细胞凋亡的影响
    3.4 结论与讨论
    参考文献
附录: 筛选化合物的结构
致谢
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本文编号：3767219