重组灵芝免疫调节蛋白冻干粉针剂的研究

发布时间：2023-04-12 05:58

　　蛋白药物开发过程中的问题之一就是蛋白质分子的不稳定性,因此开发稳定性好、有效期长、适于企业生产的药物剂型尤为重要。目前临床上通常使用水针剂和冻干粉针剂两种剂型的蛋白质药物,水针剂生产和使用方便,不需要使用前复溶,但蛋白质稳定性不好,需要低温保存,冻干粉剂型蛋白稳定性好,运输存储方便,使用前需要复溶。真菌免疫调节蛋白(Fungal immunomodulatory protein,Fip)是从灵芝、蘑菇等高等担子菌中提取的一类小分子蛋白质。其中重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma Lucidum Immunoregulatory Protein,rLZ-8)是从灵芝中提取的一种真菌免疫调节蛋白,具有血细胞凝集、促进淋巴细胞的增殖及各种细胞因子的分泌、抗肿瘤、升高白细胞等生物学活性,近年来引起了科研人员的广泛关注,具有重要的研究意义。本课题组应用毕赤酵母菌株重组表达了rLZ-8,但发现rLZ-8在水溶剂中稳定性不佳,且液体状态使得存储和运输较为麻烦,不适合制备成水针剂使用,因此研究rLZ-8的冻干粉针剂至关重要。基于以上问题,本论文首先构建rLZ-8表达菌株,优...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词
第1章 绪论
    1.1 灵芝免疫调节蛋白（LZ-8）
        1.1.1 LZ-8 简介
        1.1.2 LZ-8 的生物学活性
    1.2 毕赤酵母表达系统
        1.2.1 毕赤酵母表达系统的特点
        1.2.2 毕赤酵母表达宿主菌
        1.2.3 影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的主要因素
    1.3 rLZ-8 表达的研究进展
    1.4 蛋白质药物制剂概述
        1.4.1 蛋白质药物剂型的选择
        1.4.2 蛋白注射剂常用辅料分类
    1.5 真空冷冻干燥法
        1.5.1 真空冷冻干燥法简介
        1.5.2 真空冷冻干燥的优势
    1.6 论文的立题依据和内容
第2章 rLZ-8 表达菌株的构建及表达
    2.1 实验仪器与试剂
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 设计合成rLZ-8 片段
        2.2.2 构建重组质粒
        2.2.3 重组质粒转化酵母感受态及线性化制备筛选
        2.2.4 rLZ-8 的摇瓶小量表达
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 构建重组rLZ-8 组成型表达载体
        2.3.2 构建重组rLZ-8 组成型毕赤酵母表达菌株
        2.3.3 重组表达菌株的鉴定
    2.4 小结
    2.5 讨论
第3章rLZ-8 发酵工艺的建立及优化
    3.1 实验仪器与试剂
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 rLZ-8 菌株的中试发酵
        3.2.2 菌液粗处理
        3.2.3 rLZ-8 的纯化
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 rLZ-8 菌株中试发酵工艺的优化
        3.3.2 毕赤酵母表达rLZ-8 的发酵稳定实验
        3.3.3 HPLC测定蛋白纯度
    3.4 小结
    3.5 讨论
第4章rLZ-8 冻干粉针剂处方筛选及冻干工艺研究
    4.1 实验仪器与试剂
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 辅料筛选
        4.2.2 辅料处方组合筛选
        4.2.3 rLZ-8 冻干工艺的摸索
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 稳定剂的选择
        4.3.2 表面活性剂的选择
        4.3.3 处方组合的选择
        4.3.4 冻干条件的选择
    4.4 小结
    4.5 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3790573