胰蛋白酶产生菌的筛

发布时间：2023-04-25 04:55

　　胰蛋白酶是一种重要的蛋白酶,在医药、皮革加工、食品工业及农业领域具有重要应用价值。目前市售胰蛋白酶仍以动物源为主,受到制备成本高、动物性病毒风险以及宗教问题等因素制约,导致其应用存在限制。微生物源胰蛋白酶可以有效解决上述问题,且微生物发酵生产胰蛋白酶具有生产成本低、产量和酶活高、制备简便等特点。然而,目前多数研究仍主要围绕动物源胰蛋白酶展开,微生物胰蛋白酶的潜力还远未得到开发。本论文从某皮革厂采集样品,以脱脂奶粉为唯一碳氮源初筛产蛋白酶的菌株,再通过摇瓶发酵复筛,结合特异性酶活检测筛选获得8株具有较高胰蛋白酶活性的菌株,并择其中一株产酶达20 U·m L-1的菌株DMN6进行后续研究。通过生理生化与16S r DNA分子鉴定,将该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。通过单因素实验对菌株DMN6产酶条件进行优化,结果表明,该菌株产胰蛋白酶的最优条件为,玉米粉15 g·L-1,大豆蛋白胨15 g·L-1,磷酸氢二钾7 g·L-1,磷酸二氢钾3 g·L-1,三氯化铁5 mmol·L-1,氯化镁15 mmol·L-1,接种量为1%,37℃下培养84 h,优化...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 蛋白酶概述
        1.1.1 蛋白酶
        1.1.2 蛋白酶的分类
    1.2 胰蛋白酶概述
        1.2.1 胰蛋白酶的发现与起源
        1.2.2 胰蛋白酶的空间结构
        1.2.3 胰蛋白酶的催化机制
    1.3 胰蛋白酶的应用
        1.3.1 医药领域应用
        1.3.2 皮革加工应用
        1.3.3 食品工业应用
        1.3.4 农业应用
    1.4 胰蛋白酶近期研究进展
        1.4.1 酶的分离纯化
        1.4.2 酶的基因工程研究
        1.4.3 酶的固定化
    1.5 微生物源胰蛋白酶
        1.5.1 真菌类
        1.5.2 细菌类
    1.6 研究意义与研究内容
        1.6.1 研究意义
        1.6.2 研究内容
第二章 产胰蛋白酶菌株的筛选与鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 筛菌样品来源
        2.1.2 培养基
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 主要仪器及设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 产胰蛋白酶菌株的筛选
        2.2.2 产胰蛋白酶菌株的分子鉴定
        2.2.3 产胰蛋白酶菌株的形态及生理生化鉴定
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 产胰蛋白酶菌株的筛选
        2.3.2 产胰蛋白酶菌株的 16S rDNA分子鉴定及同源性分析
        2.3.3 菌株DMN6菌株形态特征与生理生化鉴定
    2.4 本章小结
第三章 地衣芽孢杆菌DMN6胰蛋白酶的发酵条件优化
    3.1 实验材料
        3.1.1 培养基
        3.1.2 菌株
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 主要仪器及设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 菌体生长及产酶曲线
        3.2.2 发酵条件的优化
        3.2.3 发酵培养基成分的优化
        3.2.4 中试试验
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 菌体生长及产酶曲线
        3.3.2 发酵条件对产酶的影响
        3.3.3 发酵培养基成分对产酶的影响
        3.3.4 中试试验结果
    3.4 本章小结
第四章 胰蛋白酶的分离纯化及其酶学性质
    4.1 实验材料
        4.1.1 培养基
        4.1.2 菌株
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 主要仪器及设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 胰蛋白酶的纯化
        4.2.2 BCA法测定蛋白质浓度
        4.2.3 变性蛋白凝胶电泳（SDS-PAGE）
        4.2.4 胰蛋白酶的酶学性质
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 胰蛋白酶的纯化
        4.3.2 胰蛋白酶的酶学性质
    4.4 本章小结
主要结论
展望
致谢
参考文献
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3800749