c-di-GMP的磷酸二酯酶PA4781在抗菌肽Merecidin抑制铜绿假单胞菌生物被膜中的作用

发布时间：2023-05-07 19:46

　　【背景】抗菌肽Merecidin可抑制临床菌株铜绿假单胞菌PA03生物被膜。PA4781基因是课题组通过生物信息学分析筛选出的差异表达基因,PA4781作为细菌第二信使分子环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)的磷酸二酯酶具有降解c-di-GMP的作用,其在抗菌肽Merecidin抑制生物被膜中的作用机制尚不清楚。【目的】研究细菌第二信使分子c-di-GMP的磷酸二酯酶PA4781基因在抗菌肽Merecidin抑制铜绿假单胞菌生物被膜中的作用。【方法】利用单碱基突变技术敲除PA4781基因,Sanger测序方法检测敲除的正确性。采用结晶紫染色法观察PA03菌株、PA4781过表达菌株、PA4781敲除菌株24 h生物被膜生长情况,以及在抗菌肽Merecidin 24、48、72μmol/L作用下各菌株生物被膜的生长情况。采用对羟基联苯溶液显色法检测在抗菌肽Merecidin 48、72μmol/L作用下,PA03菌株、PA4781过表达菌株、PA4781敲除菌株生物被膜藻酸盐的变化情况。【结果】Sanger测序结果显示,用pnCasPABEC系统成功实现了...

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 抗菌肽Merecidin
        1.1.3 主要试剂和仪器及培养基
        1.1.4 PCR引物
    1.2 PA4781敲除载体构建
        1.2.1 sgRNA的设计及相关引物合成
        1.2.2 sgRNA载体构建、转化及转化筛选
        1.2.3 PA03菌株电转感受态制备[15]
        1.2.4 敲除质粒的电转化及验证
    1.3 结晶紫法定量检测Merecidin在不同浓度作用下正常株、过表达株、敲除株生物被膜的变化情况
    1.4 不同浓度抗菌肽Merecidin作用下受试菌生物被膜藻酸盐产生量变化情况
    1.5 数据处理
2 结果与分析
    2.1 敲除载体构建
        2.1.1 sgRNA设计
        2.1.2 sgRNA载体构建
        2.1.3 敲除质粒转化并筛选
    2.2 不同浓度抗菌肽Merecidin作用下正常株、过表达株、敲除株生物被膜形成情况
    2.3 不同浓度抗菌肽Merecidin作用下受试菌藻酸盐产生量变化情况
3 讨论与结论



本文编号：3811223