小分子HDACi N3F对非小细胞肺癌细胞株的增殖抑制作用及其机制研究

发布时间：2023-07-25 00:39

　　肺癌(lung cancer)又称原发性肺癌,其特征是恶性程度高,临床预后差。非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型之一,约占总肺癌数的80%,而平均5年生存率不到15%。传统的治疗方法,例如外科手术可能是治疗非小细胞肺癌的有效方法,然而肺癌一经发现,基本都是中晚期,错过手术最佳治疗期。而传统的化学药物治疗肺癌普遍存在耐药性、副作用明显的特点。因此,开发新的治疗药物和新的治疗策略对于增强治疗肺癌有效性和提高肺癌患者的生存率至关重要。近期研究发现,组蛋白去乙酰化酶的活性异常与多种肿瘤的发生发展密切相关。而组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)是一类新的抑制剂类化疗药物,其通过抑制组蛋白去乙酰化酶的活性提升组蛋白的乙酰化水平,促进抑癌基因转录表达,抑制肿瘤细胞增殖,诱导其凋亡和自噬等,从而表现抗肿瘤活性而成为研究的热点。很多HDACi已经在临床试验阶段,一些已经应用于临床治疗肿瘤疾病,例如伏立诺他(vorinostat,SAHA)是首个被美国FDA批准用于治疗皮肤T淋巴细胞瘤的HDACi。N3F(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-N’-羟基辛烷二酰胺)是在SAHA的基础上进行构效修...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 肺癌的治疗现状
    1.2 细胞凋亡
    1.3 细胞自噬
    1.4 组蛋白去乙酰化酶与肿瘤
    1.5 组蛋白去乙酰化酶抑制剂与癌症治疗
    1.6 本课题研究思路
第二章 N3F的体外抗增殖作用
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 试剂与仪器
    2.2 CCK-8法检测N3F的体外抗增殖作用
        2.2.1 细胞复苏
        2.2.2 细胞传代
        2.2.3 细胞种板
        2.2.4 药物配制
        2.2.5 细胞给药
        2.2.6 OD值测定与处理
        2.2.7 实验结果
    2.3 体外细胞克隆形成实验
        2.3.1 细胞接种与给药
        2.3.2 细胞处理
        2.3.3 实验结果
    2.4 N3F对细胞迁移的作用
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 细胞处理
        2.4.3 实验结果
    2.5 小结
第三章 N3F诱导SPC-A-1细胞凋亡
    3.1 HOECHST33258染色检测细胞形态变化
        3.1.1 细胞接种与给药
        3.1.2 细胞处理
        3.1.3 实验结果
    3.2 流式细胞术检测细胞凋亡情况
        3.2.1 细胞接种与给药
        3.2.2 细胞处理
        3.2.3 实验结果
    3.3 小结
第四章 WSTERNBLOT检测NSCLC细胞中相关蛋白表达水平
    4.1 实验试剂与仪器
    4.2 实验方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 N3F对SPC-A-1细胞中HDAC3、BCL-2和BAX的影响
        4.3.2 N3F对SPC-A-1、A549细胞中自噬蛋白LC3的影响
        4.3.3 N3F对SPC-A-1、A549细胞中HDAC3与TIP60的影响
        4.3.4 N3F对SPC-A-1、A549细胞中ULK1与BECLIN-1的影响
        4.3.5 RGFP966对SPC-A-1细胞中自噬蛋白LC3的影响
    4.4 小结
第五章 讨论
展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
附录 缩略词表
致谢



本文编号：3836825