GSTA1、M1基因多态性与GST活性的关系及基于GST的环磷酰胺与白消安药动学相互作用研究
发布时间：2024-04-07 21:49
目的:检测GSTA1基因多态性和GSTM1基因缺失多态性;测定GST的活性,并阐明GSTA1和GSTM1的基因多态性对GST活性的影响。考察家兔同时进行环磷酰胺和白消安静脉注射时,GST介导下的白消安药代动力学特征;以家兔和HepG2细胞为研究对象,考察环磷酰胺对家兔和HepG2细胞内GST活性的影响。方法:1.GSTA1和GSTM1基因多态性的检测使用柱式血液基因组提取试剂盒提取血液中的DNA,并通过PCR-RFLP技术手段对提取的DNA进行聚合酶链式反应,采用DNA测序仪对PCR扩增产物进行测序,从而确定GSTA1的基因分型,以及GSTM1的基因缺失情况。2.GST活性的测定使用紫外可见分光光度计,通过测量在GST特异性催化下,GSH与CDNB的反应结合产物在340nm处吸光度增加的速率,从而推算出GST的酶活性。3.GSTA1和GSTM1基因多态性对GST活性的影响将GSTA1和GSTM1基因多态性的检测结果和GST活性结果相联系,通过SPSS统计软件,运用LSD t-test检验的方法对二者的关系进行比较。4.同时给予BUCY静注后白消安的药动学研究健康的家兔5只,给药前禁食1...
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
常用缩写词中英文对照表
前言
第一部分 GSTA1及GSTM1的基因多态性测试及分析
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.2 主要实验仪器
1.3 主要实验试剂
1.4 PCR引物设计
1.5 人血红细胞DNA的提取
1.6 PCR反应体系
1.7 PCR产物测序反应体系
1.8 数据分析
2 结果
2.1 DNA提取及质量检测
2.2 PCR产物的电泳检测结果
2.3 PCR产物碱基测序结果
2.4 GSTA1的基因多态性分析
2.5 GSTM1的基因缺失多态性分析
3 讨论
3.1 GSTA1及GSTM1基因多态性的选择
3.2 GSTA1及GSTM1基因多态性测定方法的选择
3.3 引物设计的原则
4 结论
第二部分 GST活性的测定及与GSTA1、M1基因多态性的关系
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验对象
1.3 GST活性的测定方法
1.4 精密度试验
1.5 GST活性的统计分析及与GST基因多态性分析
2 结果
2.1 精密度试验结果
2.2 GST活性分布情况
2.3 不同性别和年龄段的GST活性分析
2.4 GSTA1基因多态性对GST活性的影响
2.5 GSTM1基因缺失多态性对GST活性的影响
3 讨论
3.1 白消安及环磷酰胺的代谢机制
3.2 研究对象的选择
3.3 GST活性的测定方法及与GSTA1、M1基因多态性的关系
4 结论
第三部分 基于GST介导的环磷酰胺与白消安药动学相互作用研究
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验试剂的配制
1.3 白消安及环磷酰胺给药及血样采集方案
1.4 血清样品预处理
1.5 HPLC法测定白消安血药浓度的建立
1.6 标准曲线的绘制
1.7 家兔及HepG2细胞内环磷酰胺对GST活性的影响
2 结果
2.1 HPLC法测白消安血药浓度方法的评价
2.2 标准曲线的求算
2.3 同时静注BUCY后,BU的浓度测定结果
2.4 白消安药代动力学参数的求算
2.5 环磷酰胺对家兔体内白消安药代动力学的影响
2.6 家兔及HepG2细胞内环磷酰胺对GST活性的影响
3 讨论
3.1 白消安测定方法的确立
3.2 BU/CY同时给药对白消安代谢的影响
3.3 BU/CY给药顺序对其体内代谢动力学的影响
3.4 环磷酰胺激活GST活性的初步研究
4 结论
全文结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历
本文编号：3948020
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
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中文摘要
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前言
第一部分 GSTA1及GSTM1的基因多态性测试及分析
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.2 主要实验仪器
1.3 主要实验试剂
1.4 PCR引物设计
1.5 人血红细胞DNA的提取
1.6 PCR反应体系
1.7 PCR产物测序反应体系
1.8 数据分析
2 结果
2.1 DNA提取及质量检测
2.2 PCR产物的电泳检测结果
2.3 PCR产物碱基测序结果
2.4 GSTA1的基因多态性分析
2.5 GSTM1的基因缺失多态性分析
3 讨论
3.1 GSTA1及GSTM1基因多态性的选择
3.2 GSTA1及GSTM1基因多态性测定方法的选择
3.3 引物设计的原则
4 结论
第二部分 GST活性的测定及与GSTA1、M1基因多态性的关系
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验对象
1.3 GST活性的测定方法
1.4 精密度试验
1.5 GST活性的统计分析及与GST基因多态性分析
2 结果
2.1 精密度试验结果
2.2 GST活性分布情况
2.3 不同性别和年龄段的GST活性分析
2.4 GSTA1基因多态性对GST活性的影响
2.5 GSTM1基因缺失多态性对GST活性的影响
3 讨论
3.1 白消安及环磷酰胺的代谢机制
3.2 研究对象的选择
3.3 GST活性的测定方法及与GSTA1、M1基因多态性的关系
4 结论
第三部分 基于GST介导的环磷酰胺与白消安药动学相互作用研究
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验试剂的配制
1.3 白消安及环磷酰胺给药及血样采集方案
1.4 血清样品预处理
1.5 HPLC法测定白消安血药浓度的建立
1.6 标准曲线的绘制
1.7 家兔及HepG2细胞内环磷酰胺对GST活性的影响
2 结果
2.1 HPLC法测白消安血药浓度方法的评价
2.2 标准曲线的求算
2.3 同时静注BUCY后,BU的浓度测定结果
2.4 白消安药代动力学参数的求算
2.5 环磷酰胺对家兔体内白消安药代动力学的影响
2.6 家兔及HepG2细胞内环磷酰胺对GST活性的影响
3 讨论
3.1 白消安测定方法的确立
3.2 BU/CY同时给药对白消安代谢的影响
3.3 BU/CY给药顺序对其体内代谢动力学的影响
3.4 环磷酰胺激活GST活性的初步研究
4 结论
全文结论
参考文献
综述
参考文献
致谢
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本文编号：3948020
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