一种特异抑制c-Met与Trk的小分子化合物的活性研究

发布时间：2024-04-07 22:18

　　目的肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种源自肝脏细胞的原发性恶性肿瘤疾病。具有较高的发病率和死亡率,发病机制复杂且诱病因素较多,传统治疗方法存在预后差、复发率高以及生存期短等问题,严重威胁人类的健康生活,因此迫切需要开发一种治疗肝细胞癌的新策略。肿瘤分子靶向治疗是目前临床实践中一种先进的抗肿瘤策略,通过药物作用于特定的肿瘤关键分子,抑制肿瘤细胞存活与生长,从而达到临床治疗的目的。受体型酪氨酸激酶(RTKs)是治疗肿瘤的经典靶点,针对这些靶点而开发的小分子抑制剂(SMIs)及单克隆抗体(mAbs)取得了很大的进展。研究表明c-Met与Trk激酶与包括肝细胞癌在内的多种癌症的发生、发展密切相关,靶向抑制这两种激酶活性可能是治疗肝细胞癌的有效途径。本研究旨在明确HGF/c-Met信号通路与Trk信号通路是否存在协同作用关系,进一步研究一种特异靶向c-Met与Trk的小分子化合物L029对肝细胞癌抗肿瘤活性以及初步探究体内代谢和组织分布特点,为肝细胞癌提供新的分子靶向治疗策略。方法通过细胞实验研究HGF/c-Met与Trk信号通路之间的关联,利用选择性抑制...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 文献综述
        1.2.1 肝细胞癌与人类健康
        1.2.2 HGF/c-Met与肿瘤
        1.2.3 Trk家族蛋白与肿瘤
        1.2.4 c-Met与其他RTK存在协同作用
        1.2.5 c-Met与 Trk抑制剂的研发现状
    1.3 本文涉及的研究方法
        1.3.1 实验研究中涉及的方法
        1.3.2 统计学分析法
    1.4 研究内容
第二章 肝细胞癌中c-Met与 Trk信号通路存在协同作用关系
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞株及细胞培养
        2.2.2 细胞总蛋白样制备及Western Blot
        2.2.3 数据处理
    2.3 结果
        2.3.1 HGF共刺激可显著增强BDNF诱导的Trk信号通路活化
        2.3.2 BDNF共刺激可显著增强HGF诱导的c-Met信号通路的活化
        2.3.3 抑制c-Met激酶活化能降低BDNF对 TrkB信号通路的活化作用
        2.3.4 抑制Trk激酶活化能降低HGF对 c-Met信号通路的活化作用
    2.4 小结与讨论
第三章 L029 对裸鼠体内肝癌细胞生长及转移的抑制作用
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要化合物
        3.1.3 实验动物
        3.1.4 主要试剂
        3.1.5 主要仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 裸鼠肝细胞癌皮下肿瘤模型建立
        3.2.2 裸鼠肝细胞癌原位移植模型建立
        3.2.3 动物分组及给药方案
    3.3 结果
        3.3.1 L029 包合物抑制裸鼠HepG2 肝癌细胞原位肿瘤生长
        3.3.2 L029 包合物抑制MHCC97H细胞肝内转移及提高裸鼠生存率
    3.4 小结与讨论
第四章 C57BL/6 小鼠静脉给药L029 组织分布研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 化合物
        4.1.3 主要设备与仪器
        4.1.4 主要试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 动物分组及样品的采集制备
        4.2.2 样品检测
        4.2.3 数据处理
    4.3 结果
        4.3.1 标准曲线建立
        4.3.2 小鼠血浆中药物浓度变化
        4.3.3 L029 单次静脉注射不同时间点小鼠各组织中药物浓度
    4.4 小结与讨论
第五章 肝细胞癌原位移植活体荧光成像模型的建立
    5.1 实验材料
        5.1.1 细胞株及质粒
        5.1.2 实验动物
        5.1.3 主要仪器与设备
        5.1.4 主要试剂
    5.2 实验方法
        5.2.1 质粒大提与慢病毒包装
        5.2.3 慢病毒滴度检测
        5.2.4 细胞系的建立
        5.2.5 萤火虫萤光素酶表达鉴定
        5.2.6 皮下肿瘤模型的建立
        5.2.7 肝癌原位移植模型的建立及分组给药
        5.2.8 统计学分析
    5.3 结果
        5.3.1 pCDH-GFP-Luc慢病毒的包装及滴度测定
        5.3.2 细胞系的建立及鉴定
        5.3.3 细胞自发荧光强度与细胞数目线性相关
        5.3.4 皮下瘤活体成像
        5.3.5 成功建立裸鼠肝细胞癌原位移植模型
    5.4 小结与讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 本文创新点
    6.3 展望
参考文献
附录1
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3948059